本文關(guān)鍵詞：大鼠髁突軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及靜水壓力下凋亡蛋白的變化　出處：《新疆醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:探索大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)方法;研究細(xì)胞在不同靜水壓力作用下TRPM7和Fas蛋白的表達(dá)變化規(guī)律,探討Fas通道和TRPM7途徑是否在MCCs凋亡中發(fā)揮作用。方法:分離Wistar大鼠髁突軟骨,用II型膠原酶消化法結(jié)合組織塊法獲取干細(xì)胞,MTT檢測其生長曲線,甲苯胺藍(lán)染色、II型膠原免疫組化法和II型膠原免疫熒光法鑒定軟骨細(xì)胞來源。取生物學(xué)性能最佳的一代細(xì)胞,隨機(jī)分為2組。實(shí)驗(yàn)組給予細(xì)胞不同大小和時長的靜水壓力;對照組除不加壓外其余培養(yǎng)條件相同。加壓結(jié)束后,立即通過Western Blot檢測每組TRPM7和Fas的蛋白量。結(jié)果:II型膠原酶消化法結(jié)合組織塊法消化髁突軟骨組織18~20小時可獲得最大量細(xì)胞;形態(tài)學(xué)觀察軟骨細(xì)胞主要呈多角形,第1~4代細(xì)胞具有穩(wěn)定的生物學(xué)特性,5代及以后逐漸出現(xiàn)衰老細(xì)胞;MTT測第3代細(xì)胞最快達(dá)對數(shù)生長期;甲苯胺藍(lán)染色、II型膠原免疫組化染色及II型膠原免疫熒光染色均表達(dá)陽性,提示MCCs來源于軟骨的可靠性。加壓時間為1h/2h時,6Kpa、8Kpa、10Kpa實(shí)驗(yàn)組的Fas蛋白量均低于對照組,P0.05;當(dāng)壓力值為20Kpa/2h、30Kpa/1h、30Kpa/2h時,實(shí)驗(yàn)組蛋白高于對照組,P0.05。當(dāng)壓力為20KPa/1h時,對照組蛋白與實(shí)驗(yàn)組無差異,P0.05。加壓時間分別為1h/2h時,6Kpa、8Kpa、10Kpa、20Kpa實(shí)驗(yàn)組的TRPM7蛋白量均低于對照組,P0.05。當(dāng)壓力值為30Kpa/2h時,實(shí)驗(yàn)組蛋白高于對照組,P0.05。當(dāng)壓力值為30Kpa/1h時,兩組蛋白無差異,P0.05。結(jié)論:II型膠原酶聯(lián)合組織塊消化法獲取的干細(xì)胞來源可靠。較小壓力值和時間作用下凋亡蛋白表達(dá)下降,提示可能對軟骨細(xì)胞的凋亡有抑制作用。壓力值超過一定界值或延長加壓時間后,細(xì)胞凋亡蛋白增加,提示此條件可能對軟骨細(xì)胞的凋亡有促進(jìn)作用。兩通道均有可能參與異常壓力下MCCs的凋亡,為進(jìn)一步研究TMD病因機(jī)制提供思路。
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R782.6

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