本文關(guān)鍵詞：miR-145對卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

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【摘要】：目的:探討miR-145對卵巢癌SKOV3細(xì)胞侵襲遷移的影響及可能的作用機(jī)制,為臨床治療卵巢癌提供一個新的方向。方法:(1)穩(wěn)定表達(dá)miR-145的細(xì)胞系(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)及陰性對照細(xì)胞系(mock-CMW-RFP-SKOV3)的建立:以慢病毒作為載體進(jìn)行包裝,慢病毒感染SKOV3細(xì)胞,puromycin篩選穩(wěn)定的細(xì)胞系,挑取單克隆及擴(kuò)大培養(yǎng),強(qiáng)分泌目的蛋白的細(xì)胞株的多次篩選,獲取穩(wěn)定表達(dá)miR-145細(xì)胞系(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)以及陰性對照組(mock-CMW-RFP-SKOV3);(2)SKOV3細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立及裸鼠的體內(nèi)實驗:SKOV3細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立,觀察裸鼠皮下腫瘤生長情況、繪制腫瘤生長曲線;生物發(fā)光活體成像技術(shù)示蹤裸鼠移植瘤模型中的卵巢癌生長及擴(kuò)散;處死小鼠獲取腫瘤組織,用Western Blot方法檢測各組腫瘤組織中MUC1以及EMT標(biāo)志性蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Fibronectin、Vimentin)的表達(dá)水平。結(jié)果:成功的構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)miR-145及紅色熒光蛋白的細(xì)胞系(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)及表達(dá)無意義序列及紅色熒光蛋白的陰性對照細(xì)胞系(mock-CMW-RFP-SKOV3);成功的建立三組SKOV3細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型;繪制腫瘤生長曲線:與空白對照組(SKOV3)比,實驗組(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)裸鼠腫瘤體積明顯減小,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。與空白對照組(SKOV3)比,陰性對照組(mock-CMW-RFP-SKOV3)的裸鼠腫瘤體積有減小但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);細(xì)胞接種腫瘤體積隨時間延長而增大,而構(gòu)建的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)的實驗組在接種5d后均有熒光素酶表達(dá),而陰性對照組(mock-CMW-RFP-SKOV3)的熒光素酶表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過實驗組(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)。隨著接種天數(shù)的增加,細(xì)胞濃度遞增,熒光素的表達(dá)量快速增加;Western Blot檢測實驗組(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)的MUC1、N-cadherin、Fibronectin、Vimentin的蛋白表達(dá)量明顯減少,而E-cadherin的表達(dá)量增加。結(jié)論:本實驗成功構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)miR-145及紅色熒光蛋白的細(xì)胞系(miR-145-CMV-RFP-SKOV3)及表達(dá)無意義序列及紅色熒光蛋白的陰性對照細(xì)胞系(mock-CMW-RFP-SKOV3)。經(jīng)裸鼠體內(nèi)實驗表明,miR-145的高表達(dá)抑制SKOV3細(xì)胞移植瘤的生長。穩(wěn)定高表達(dá)的miR-145可使卵巢癌細(xì)胞中MUC1蛋白表達(dá)量下降,E-cadherin表達(dá)量增加,N-cadherin、Fibronectin、Vimentin的蛋白表達(dá)量明顯減少,推測miR-145可能通過抑制腫瘤細(xì)胞的EMT過程,從而抑制卵巢癌細(xì)胞的侵襲遷移能力。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.31

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本文編號：1304204