本文關(guān)鍵詞：急性淋巴細(xì)胞白血病患兒腸道菌群的改變及與近期應(yīng)用抗生素的關(guān)系

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【摘要】：研究背景急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是兒童最常見(jiàn)的惡性腫瘤,但其病因和發(fā)病機(jī)制至今尚不完全清楚,其中免疫微環(huán)境的紊亂是其發(fā)病的重要原因之一。腸道作為免疫系統(tǒng)重要的組成部分,棲息著大量的微生物。腸道免疫系統(tǒng)的發(fā)育很大程度上依賴(lài)于與腸道微生物的相互作用。腸道微生物的變化可能會(huì)引起人體功能狀態(tài)的改變;同時(shí),疾病狀態(tài)造成的免疫、代謝等方面的紊亂也可以通過(guò)對(duì)腸道微生物群的分析來(lái)評(píng)估。但是,ALL狀態(tài)對(duì)腸道微生物群有何影響尚未闡明。研究目的1.研究ALL患兒腸道菌群結(jié)構(gòu)的改變,尋找有鑒別意義的微生物標(biāo)記,為進(jìn)一步在細(xì)胞和分子水平研究微生物與黏膜免疫的相關(guān)機(jī)制提供理論依據(jù);2.分析近期應(yīng)用抗生素對(duì)ALL患兒腸道菌群的影響;3.分析ALL患兒初診時(shí)的腸道菌群多樣性與菌群失調(diào)能否影響化療效果及化療后并發(fā)癥,為ALL的癥狀控制提供新思路。研究對(duì)象與方法1.研究對(duì)象收集30例初診急性淋巴細(xì)胞白血病患兒的大便標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組,33例健康同齡兒的大便標(biāo)本作為對(duì)照組,根據(jù)3個(gè)月內(nèi)有無(wú)抗生素(ATBx)使用史,將其分為ALL+ATBx、ALL、CON+ATBx、CON四組。2.目的基因提取與測(cè)序提取基因組DNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物純化,對(duì)經(jīng)定量和均一化的PCR產(chǎn)物基于Illumina平臺(tái)對(duì)其進(jìn)行高通量測(cè)序,并對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析。3.根據(jù)生物信息學(xué)分析結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析:①通過(guò)比較每2組間的α多樣性來(lái)比較各組個(gè)體的物種多樣性和物種豐度;②通過(guò)比較每2組間的β多樣性來(lái)比較各組不同個(gè)體間的物種分布差異;③通過(guò)比較不同分類(lèi)水平的各物種的相對(duì)豐度來(lái)描述物種組成方面的差異;④通過(guò)線(xiàn)性判別分析效應(yīng)量(LEfSe)分別比較ALL組與CON組、ALL+ATBx組與CON+ATBx組,根據(jù)LDA值發(fā)現(xiàn)具有顯著差異的物種,并篩選具有鑒別意義的微生物標(biāo)志。4.隨訪(fǎng)與回顧性分析通過(guò)對(duì)入組患兒的隨訪(fǎng),研究化療效果及化療后感染性并發(fā)癥與患兒治療前腸道菌群多樣性及微生態(tài)失衡的關(guān)系。結(jié)果1.α多樣性方面,將衡量物種多樣性的Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)進(jìn)行比較得到:Shannon index(ALL)Shannon index(CON),P0.05;Shannon index(CON+ATBx)Shannon index(CON),P0.05;Shannon index(ALL+ATBx)Shannon index(CON),P0.01;Simpson index(ALL)Simpson index(CON),P0.05;Simpson index(CON+ATBx)Simpson index(CON),P0.05;Simpson index(ALL+ATBx)Simpson index(CON),P0.01;衡量物種豐度的指數(shù)Chao1指數(shù)和Ace指數(shù)各組間無(wú)明顯差異。2.β多樣性方面:PCoa分析與NMDS分析示ALL組與CON組、ALL+ATBx組與CON+ATBx組分別顯示出明顯的分布區(qū)域性。3.物種組成方面:4組樣本在不同分類(lèi)學(xué)水平的物種組成方面有差異;厚壁菌門(mén)/擬桿菌門(mén)比值(F/B):F/B(CON+ATBx)F/B(CON),(P0.05);4.LEfSe分析示,ALL+ATBx組與CON+ATBx組間有顯著差異的物種數(shù)明顯少于ALL組與CON組間;比較ALL組與CON組,在ALL組LDA值較大的擬桿菌目的ROC曲線(xiàn)下面積(AUC)為0.735,腸球菌科的AUC為0.724;比較ALL+ATBx組與CON+ATBx組,未發(fā)現(xiàn)AUC0.7的物種。5.隨訪(fǎng)及回顧性分析示:①患兒腸道菌群的Shannon指數(shù):化療第19天微小殘留病變(MRD)≥ 1%組與MRD1%組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,有并發(fā)癥組與無(wú)并發(fā)癥組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;②患兒腸道菌群的F/B:化療第19天MRD ≥ 1%組與MRD1%組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,有并發(fā)癥組與無(wú)并發(fā)癥組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1.ALL患兒的腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯的改變;2.近期抗生素的使用對(duì)ALL引起的α多樣性的降低有干擾作用,并可引起ALL患兒腸道菌群組成成分的變化;3.擬桿菌、腸球菌在患兒腸道菌群中豐度較高,LDA值及AUC較大,可作為鑒別ALL的微生物學(xué)標(biāo)志,在近期無(wú)抗生素使用史的兒童群體中具有診斷價(jià)值;4.ALL患兒化療前腸道菌群的α多樣性或菌群失調(diào)對(duì)患兒的化療效果及化療后感染性并發(fā)癥的發(fā)生無(wú)顯著影響。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R733.71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 黃永坤;楊武;曹志瑯;王艷麗;婁俊麗;姚萍;;正常和不同疾病兒童腸道細(xì)菌DNA含量的動(dòng)態(tài)測(cè)量[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2011年03期

2 陳渝萍,文博;白血病患者化療前腸道菌群狀態(tài)初步分析[J];臨床血液學(xué)雜志;1998年05期

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本文編號(hào)：1296406