本文關鍵詞：印度獐牙菜抗肝纖維化作用及物質基礎初步研究

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【摘要】：肝纖維化是肝臟對各種慢性肝損傷的代償反應所形成的肝臟瘢痕組織,主要表現(xiàn)為肝內細胞外基質成分(ECM)過度異常地沉積進而形成纖維化。肝纖維化是慢性肝病進一步發(fā)展為肝硬化乃至肝癌的重要病理過程,極大地威脅著人類健康。近年來,國內外學者不斷探索治療肝纖維化的方法和措施,但因其發(fā)生發(fā)展機制的復雜性,并且作用環(huán)節(jié)較多,致使臨床治療仍處在摸索階段,迄今仍缺乏針對性強、療效顯著、毒副作用小的藥物。藏藥是祖國醫(yī)藥的寶貴財富,在肝臟疾病的治療上有著獨特的效果,治療肝病歷史悠久,具有多成分、多途徑、多靶點協(xié)同作用的優(yōu)勢。但長期以來對其研究遠滯后于中藥,因此加大藏藥的基礎研究,從中挖掘具有較好活性的抗肝纖維化藥物具有重要意義。印度牙菜,藏藥名"甲蒂",為龍膽科植物印度獐牙菜Swertiachirayita(Roxb.ex Flemi)Karsten的干燥全草,具有清肝利膽,退諸熱之功效,用于黃疸型肝炎,病毒性肝炎以及血熱癥。該藥臨床應用歷史悠久,是治療肝臟疾病的"蒂達"上品,亦是課題組獲得二期臨床批件的抗肝纖維化新藥"郎慶阿塔顆粒"中的一味主要藥味,然而其是否具有抗肝纖維化活性有待進一步研究,藥效物質基礎有待進一步闡明。因此,本課題對印度獐牙菜體內、體外抗肝纖維化活性進行了初步研究;運用代謝組學的研究方法對其抗肝纖維化可能的作用機制進行了探討;運用UPLC-Q-TOF-MS技術對其化學成分進行了分析,初步闡明了物質基礎,以希望為發(fā)掘抗肝纖維化的藥物提供新途徑。具體研究內容主要包括以下5個部分:1、文獻研究本課題對肝纖維化的發(fā)生機制和中藥治療肝纖維化的研究進展進行了剖析;對代謝組學的研究進展進行了綜合分析;對印度獐牙菜化學成分的理化性質、藥效等方面的基礎研究內容進行了歸納、總結。2、印度獐牙菜體內抗肝纖維化作用研究為考察印度獐牙菜對肝纖維化的防治作用,本實驗采用40%CCl4/橄欖油溶液以2 mL·kg-1的劑量腹腔注射,誘導SD大鼠肝纖維化模型。造模當天開始,給藥組灌胃印度獐牙菜不同部位提取藥物,模型對照組與空白對照組分別灌胃等體積的生理鹽水,每天1次,共8周。采用MASSON染色法觀察肝組織病理學變化;采用ELISA法測定血清中肝纖維化指標透明質酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、三型前膠原(PCⅢ)和Ⅳ型膠原蛋白(ColⅣ)水平;采用酶法等測定血清中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽紅素(TBIL)等肝功能指標。結果表明大鼠肝纖維化模型造模成功(P0.05),印度獐牙菜各提取物組均可顯著降低CCl4致肝纖維化大鼠血清ALT、AST、ALP活性,減少HA、CIV、LN及PCⅢ含量(P0.05),明顯改善肝臟組織病變的狀況,減輕肝纖維組織增生、肝細胞脂肪變性,顯示印度獐牙菜有較好的防治肝纖維化作用。3、印度獐牙菜體外抗肝纖維化作用研究四氮唑藍實驗(MTT)法觀察印度獐牙菜對大鼠肝星狀細胞增殖的影響。實驗結果表明印度獐牙菜醇提物和各提取部位組均能抑制HSC細胞的增殖,隨著給藥濃度的增高,抑制HSC增殖作用增強,呈現(xiàn)出一定的濃度依賴性。體外抗肝纖維化的實驗表明印度獐牙菜具有抗肝纖維化的作用。4、印度獐牙菜抗肝纖維化血清代謝組學研究運用代謝組學方法研究肝纖維化大鼠血清代謝產物的變化。研究中運用超高效液相色譜-電噴霧四級桿飛行時間質譜(UPLC-Q-TOF-MS)技術對正常組、肝纖維化模型組、印度獐牙菜給藥組大鼠血清進行代謝圖譜的鑒定分析,運用主成分分析(PCA)及偏最小二乘法—判別分析(PLS-DA)等多變量數據分析方法,尋找出模型組和對照組之間內源性標志物17個,涉及到色氨酸代謝、膽汁酸代謝等8個代謝途徑,初步表明印度獐牙菜抗肝纖維化的作用機制與參與上述代謝途徑有關。5、印度獐牙菜化學成分UPLC-Q-TOF-MS分析運用UPLC-Q-TOF-MS技術對藏藥印度獐牙菜的化學成分進行定性分析,色譜條件為色譜柱:ACQUITY HSST3(2.1 mm × 100 mm,1.8 μm),流動相:含 0.1%甲酸的乙腈-0.1%甲酸溶液按程序梯度洗脫,流速:0.4 mL/min。質譜使用ESI離子源,正負離子模式掃描,通過精確質譜信息及元素組成分析,結合Scifinder數據庫、對照品信息和相關文獻,鑒定出印度獐牙菜化學成分24個,包括6個環(huán)烯醚萜、11個(?)酮、2個黃酮、2個異香豆素、2個酚類及1個三萜�？傊�,通過以上5個方面的系統(tǒng)研究,本課題從體內外證實了印度獐牙菜具有較好的抗肝纖維化作用,明確了其抗肝纖維化的代謝組學機制,初步揭示了其物質基礎,為印度獐牙的深度開發(fā)利用提供科學依據,為抗肝纖維化藥物的發(fā)掘提供了新途徑。
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R29

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