本文關(guān)鍵詞：烏藥葉槲皮苷治療心血管疾病藥效學(xué)評(píng)價(jià)及作用機(jī)制研究

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【摘要】：烏藥(Lindera aggregate(Sims)Kosterm)是樟科(Lauraceae)山胡椒屬植物,浙江天臺(tái)地區(qū)的道地藥材,具有較好的防治心腦血管疾病的效果。課題組前期研究表明,烏藥葉中的黃酮類化合物是其主要的活性成分類型之一,而其中槲皮苷(Quercitrin,QI)含量最高(原藥材中含量可達(dá)9.705mg/g,總黃酮中含量可達(dá)50%以上)為代表性成分,具有較大的開發(fā)利用價(jià)值。因此,本課題以烏藥葉單體成分槲皮苷為研究對(duì)象,考察其體內(nèi)外抗心血管疾病的藥理活性,并初步探討其抗氧化作用機(jī)制。首先,本論文采用老齡大鼠和急性血瘀大鼠模型,考察尾靜脈注射槲皮苷4 mg/kg、8 mg/kg和16 mg/kg對(duì)大鼠血清和組織中抗氧化酶含量和氧化產(chǎn)物以及血液流變學(xué)指標(biāo)的影響。研究結(jié)果表明,槲皮苷中劑量(8mg/kg)即可顯著提高老齡鼠體內(nèi)抗氧化酶(T-SOD,GSH)的水平,明顯降低丙二醛(MDA)的含量;槲皮苷中、高劑量(8mg/kg和16mg/kg)可顯著降低大鼠全血粘度,但對(duì)血漿粘度和紅細(xì)胞壓積作用不大。其次,論文采用過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelialcells,HUVECs)和大鼠心肌細(xì)胞(H9C2)氧化應(yīng)激損傷模型,研究槲皮苷對(duì)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明,在槲皮苷預(yù)處理給藥(APT)、同時(shí)給藥(ACT)和后處理給藥(APOT)三種給藥方式下,ACT較APT和APOT效果顯著,且槲皮苷濃度范圍在62.5 μM-500μM時(shí)可劑量依賴性的顯著提高HUVECs和H9C2的細(xì)胞活力。最后,針對(duì)HUVECs采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光、western blotting、DNA Ladder和熒光定量PCR(qPCR)等技術(shù)手段在抗氧化機(jī)制方面展開研究。通過(guò)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液中超氧化物歧化酶(SOD)和還原型谷胱甘肽(GSH)等抗氧化物酶含量分析、細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的檢測(cè)以及目的蛋白的細(xì)胞定位和表達(dá)含量分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)APT和ACT均可提高細(xì)胞中T-SOD和GSH的含量,抑制活性氧的產(chǎn)生,抑制細(xì)胞凋亡和DNA損傷,顯著上調(diào)抗氧化基因NRF2和OH-1基因水平;信號(hào)通路研究表明APT和ACT可激活HUVECs中Keap-1/Nrf2系統(tǒng),促進(jìn)Nrf2核轉(zhuǎn)位,抑制過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的caspase家族活化。然而,經(jīng)ACT處理HUVECs后,槲皮苷抑制了過(guò)氧化氫造成的自噬阻斷,使LC3B蛋白表達(dá)增加,促進(jìn)SQSTM1的降解;在ACT中給予自噬抑制劑3-MA,HUVECs細(xì)胞活力下降,Nrf2核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象消失,提示自噬過(guò)程的激活可能是兩種給藥方式抗氧化作用稍有差異的原因之一。本論文首次揭示了槲皮苷在ACT處理方式下HUVECs中Nrf2-Keap-1抗氧化系統(tǒng)和自噬過(guò)程緊密聯(lián)系的機(jī)制。綜上,烏藥葉槲皮苷具有良好的抗氧化和活血祛瘀作用,具有較高的開發(fā)利用價(jià)值,本論文的研究為其在治療心血管疾病的開發(fā)應(yīng)用上建立了科學(xué)研究基礎(chǔ),對(duì)改善心血管疾病有重要意義。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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