本文關(guān)鍵詞：β-catenin在橋本氏甲狀腺炎淋巴細(xì)胞浸潤中的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的:大量淋巴細(xì)胞浸潤甲狀腺組織是橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)疾病的主要病理特點(diǎn)。本文旨在探討β-catenin是否參與調(diào)節(jié)橋本氏甲狀腺炎組織中趨化因子的產(chǎn)生進(jìn)而影響淋巴細(xì)胞向甲狀腺組織浸潤這一過程,探索其分子作用機(jī)制,為HT致病機(jī)制的研究提供新的方向。方法:1.采用HE染色法檢測橋本氏甲狀腺炎以及單純結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者甲狀腺組織中淋巴細(xì)胞的浸潤情況。2.采用免疫組織化學(xué)法檢測橋本氏甲狀腺炎以及單純結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者甲狀腺組織中β-catenin、IFN-γ的表達(dá)情況。3.甲狀腺上皮細(xì)胞株Nthy-ori 3-1用不同濃度IFN-γ(250、500、1000 U/mL)處理后,采用Western blot檢測細(xì)胞全蛋白中β-catenin的表達(dá)、細(xì)胞核/漿蛋白中β-catenin的表達(dá),并采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測β-catenin的mRNA水平。4.甲狀腺上皮細(xì)胞株Nthy-ori 3-1經(jīng)IFN-γ(500 U/mL)單獨(dú)處理不同時(shí)間(1.5、3、6、12、24 h)后,Western blot檢測Wnt信號(hào)通路蛋白p-GSK-3β、GSK-3β及β-catenin的表達(dá)變化。5.甲狀腺上皮細(xì)胞株Nthy-ori 3-1經(jīng)IFN-γ(500 U/m L)單獨(dú)處理或IFN-γ(500 U/mL)聯(lián)合LiCl(10 mM)處理后,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清,蛋白芯片法檢測其中38種趨化因子的分泌情況,實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測趨化因子mRNA的表達(dá)水平。6.用siRNA-GSK-3β轉(zhuǎn)染甲狀腺上皮細(xì)胞株Nthy-ori 3-1后,檢測IFN-γ處理對趨化因子調(diào)節(jié)作用的變化。7.用siRNA-β-catenin轉(zhuǎn)染甲狀腺上皮細(xì)胞株Nthy-ori 3-1后,檢測IFN-γ處理對趨化因子調(diào)節(jié)作用的變化。結(jié)果:1.橋本氏甲狀腺炎組織中淋巴細(xì)胞浸潤明顯高于正常對照組,ifn-γ表達(dá)水平明顯高于正常對照組,而β-catenin表達(dá)水平明顯低于正常對照組。2.與對照組相比,梯度濃度ifn-γ處理致甲狀腺上皮細(xì)胞β-catenin蛋白表達(dá)水平明顯下降,β-catenin入核減少,以500u/mlifn-γ處理組降低最明顯(p0.05);而β-catenin的mrna水平并無明顯改變。3.與對照組相比,甲狀腺上皮細(xì)胞經(jīng)ifn-γ(500u/ml)單獨(dú)處理不同時(shí)間(1.5、3、6、12、24h)后,p-gsk-3β的蛋白表達(dá)水平明顯增高,而β-catenin的蛋白表達(dá)從6h組開始明顯降低(p0.01)。4.與對照組相比,ifn-γ處理可致甲狀腺上皮細(xì)胞趨化因子ccl2、ccl5、cxcl10、cxcl16、gro蛋白分泌增加(p0.05);而較ifn-γ處理組,ifn-γ聯(lián)合licl處理組ccl5、cxcl16、gro分泌降低(p0.05),而ccl2、cxcl10無明顯變化。5.用sirna-gsk-3β聯(lián)合ifn-γ處理甲狀腺上皮細(xì)胞株nthy-ori3-1,與單獨(dú)ifn-γ處理組相比,趨化因子ccl5、cxcl16、gro-2、gro-3的分泌水平下降(p0.05)。6.用sirna-β-catenin聯(lián)合ifn-γ處理甲狀腺上皮細(xì)胞株nthy-ori3-1,與單獨(dú)ifn-γ處理組相比,趨化因子gro-2、gro-3、ccl5、cxcl16的分泌水平增加(p0.05)。結(jié)論:橋本氏甲狀腺炎患者的甲狀腺組織中淋巴細(xì)胞大量浸潤、ifn-γ表達(dá)明顯增加,而甲狀腺濾泡細(xì)胞中β-catenin表達(dá)明顯減少;體外實(shí)驗(yàn)顯示,ifn-γ通過活化wnt信號(hào)蛋白gsk-3β使得β-catenin的降解增加,并促進(jìn)趨化因子的分泌。采用licl或sirna抑制gsk-3β的蛋白活性能夠逆轉(zhuǎn)ifn-γ對趨化因子分泌的誘導(dǎo)作用,而采用sirna抑制β-catenin的表達(dá)能夠增強(qiáng)ifn-γ對趨化因子分泌的誘導(dǎo)作用。上述結(jié)果提示IFN-γ可通過甲狀腺上皮細(xì)胞GSK-3β/β-catenin途徑對趨化因子的分泌進(jìn)行調(diào)控,可能是誘導(dǎo)橋本氏甲狀腺炎淋巴細(xì)胞浸潤的重要機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R581.4

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本文編號(hào)：1267296