研究背景:成體神經(jīng)干細(xì)胞通常是以靜息和激活兩種可互相轉(zhuǎn)換但截然不同的狀態(tài)存在。神經(jīng)干細(xì)胞靜息/激活一旦失衡可能導(dǎo)致衰老和病理?xiàng)l件下神經(jīng)再生的異常,造成腦機(jī)能減退、認(rèn)知能力受損、神經(jīng)退行性疾病以及腫瘤的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)腦組織損傷后,靜息的神經(jīng)干細(xì)胞被大量激活,迅速增殖,以實(shí)現(xiàn)神經(jīng)再生和維持正常腦功能。但過度的增殖,往往造成干細(xì)胞庫的耗竭,導(dǎo)致神經(jīng)再生能力的永久喪失。機(jī)體如何調(diào)控腦組織損傷后靜息/激活之間的平衡,以維持干細(xì)胞庫的穩(wěn)態(tài),保證持久的神經(jīng)再生能力,促進(jìn)組織損傷修復(fù)是目前研究的熱點(diǎn)。有研究表明腦缺血損傷或病毒感染時內(nèi)源性干擾素表達(dá)增加,誘導(dǎo)靜息干細(xì)胞激活,促進(jìn)干細(xì)胞增殖,實(shí)現(xiàn)組織損傷后修復(fù);另一方面已證實(shí)骨形成蛋白（BMP）信號通路能夠維持包括成體神經(jīng)干細(xì)胞在內(nèi)的多種干細(xì)胞靜息,實(shí)現(xiàn)干細(xì)胞庫的穩(wěn)態(tài)。BMP在神經(jīng)干細(xì)胞靜息激活中發(fā)揮重要作用。抑制BMP信號通路可部分恢復(fù)老年小鼠神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力,促進(jìn)神經(jīng)再生,逆轉(zhuǎn)衰老誘發(fā)的腦病變。Ⅰ型干擾素家族成員干擾素β（IFNβ）作為免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子,在腦環(huán)境穩(wěn)態(tài)維持、衰老和神經(jīng)退行性疾病的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。阻斷腦內(nèi)Ⅰ型干擾素信號通路可部分恢復(fù)... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?ｈＮＳＣ神經(jīng)干性鑒定??Ａ：?ｈＮＳＣ?ＳＯＸ２免疫熒光染色結(jié)果Ｂ：?ｈＮＳＣ?ｎｅｓｔｉｎ免疫熒光染色結(jié)果標(biāo)尺＝５０?ｎ?ｍ??

?山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文???Ａ?ＤＡＰＩ?ＳｌＯＯ－ｂｃｔａ?Ｔｕｊｌ??■■■■??Ｂ?ＤＡＰＩ?ＳｌＯＯ－ｈｃｔａ?Ｔｕｊｌ??■■■■??圖１－２?ｈＮＳＣ多向分化能力的鑒定??Ａ：誘導(dǎo)神經(jīng)分化后ＳｌＯＯ－ｂｅｔａ、Ｔｕｊｌ免疫熒光染色結(jié)果Ｂ：誘導(dǎo)膠質(zhì)分化后ＳｌＯＯ－ｂｅｔａ、Ｔｕｊｌ免??疫熒光染色結(jié)果標(biāo)尺＝５０?ｕ?ｍ??Ｆｉｇ?１－２?Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｈＮＳＣｓ?ａｂｏｕｔ?ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ａｂｉｌｉｔｙ??Ａ：?Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＳＩ?００－ｂｅｔａ?ｖ?Ｔｕｊｌ?ｉｎ?ｈＮＳＣ?ａｆｔｅｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ?ｔｏ?ｎｅｕｒｏｎ，?Ｂ：??Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＳＩ?００－ｂｅｔａ?ｖ?Ｔｕｊｌ?ｉｎ?ｈＮＳＣ?ａｆｔｅｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ?ｔｏ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅ，?Ｂａｒ＝５０｜ｊｉｎ??干細(xì)胞定向分化能力的評判指標(biāo)［２９］。通過ｌ｜ｉＭ?ＲＡ＋?５｜ｉＭ?Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ、５０ｎｇ／ｍｌ?ＢＭＰ４??＋１０４?ｕｎｉｔｓ?ＬＩＦ分別誘導(dǎo)神經(jīng)千細(xì)胞向神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞分化，細(xì)胞Ｔｕｊｌ和Ｓ１００－??ｂｅｔａ免疫熒光染色顯示神經(jīng)于細(xì)胞是否定向分化為神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞，從而判斷神經(jīng)??千細(xì)胞是否具有多向分化潛能。圖１－２Ａ結(jié)果顯示在ＲＡ＋?Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ處理下大部分細(xì)??胞為Ｔｕｊｌ免疫染色強(qiáng)陽性，說明人源神經(jīng)千細(xì)胞可以誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元。圖１－２Ｂ結(jié)??果顯示在ＢＭＰ４?＋?ＬＩＦ處理下大部分細(xì)胞表現(xiàn)為Ｓ１００－ｂ

ｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ）處理ｈＮＳＣ?５天后，結(jié)果顯示，ＦＧＦ組細(xì)胞胞體??小，立體發(fā)亮．，顏色發(fā)黑，細(xì)胞正常生長；ＢＭＰ４處理的細(xì)胞都發(fā)生形態(tài)變化，體積??變大，顏色變淺，伸出細(xì)長突起（＿１－３）。與ＦＧＦ對照組相比，ＢＭＰ４處理細(xì)胞數(shù)??目均減少，２０ｎｇ／ｍｌ?ＢＭＰ４處理細(xì)胞數(shù)目減少顯著。??２０ｎｇ／ｍｌ?ＦＧＦ?和?２?種濃度?ＢＭＰ４?（２０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ）配比處理?ｈＮＳＣ?５?天后，結(jié)果??顯示，２種濃度ＢＭＰ４處理均能改變細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞變化與之前一致（圖１－３）。再??一次說明神經(jīng)千細(xì)胞對ＢＭＰ４處理產(chǎn)生了反應(yīng)。２種濃度ＢＭＰ４?（２０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ）??與高濃度ＦＧＦ配比均能使細(xì)胞數(shù)目減少。結(jié)果提示ＢＭＰ４抑制人源神經(jīng)干細(xì)胞的生??長．ａ??ＢＭＰ?４??ｎｇ／ｍｌ?２（）ｎ＾ｍｌ?５０?叩／ｍｌ??■■■??１—??圖１－３?ＢＭＰ４與ＦＧＦ不同配比對ｈＮＳＣ細(xì)胞形態(tài)的影響標(biāo)尺＝５０叫ｉ??Ｆｉｇ?１－３?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＢＭＰ４／?ＦＧＦ?ｏｎ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｈＮＳＣｓ?Ｂａｒ＝５０｜ｘｍ??２．２．２?ＢＭＰ４對ｈＮＳＣ細(xì)胞周期的影卩向??既然ＢＭＰ４囡＇子的加入使得細(xì)胞形態(tài)改變，生長減慢，那么是否對細(xì)胞周期產(chǎn)生??擧響？為解決■上述問．題，我們收：集正常生長和ＢＭＰ４處理的細(xì)胞、，扉定＊用Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ??ｉｏｄｉｄｅ染料染色，流式細(xì)胞分析檢測細(xì)胞周期的變化。從流式分析圖發(fā)現(xiàn)，正常增殖??的人源神經(jīng)千細(xì)胞〇３－＆期所在的峰（第一個紅色的峰）峰值低，面積小，說明處于??這個時期的細(xì)胞數(shù)少，而且Ｇ２／Ｍ期所在的峰可見，具有一定的


本文編號：3543801