1型鴨甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 1,DHAV-1）屬于小RNA病毒科,禽肝病毒屬,主要引起1³周齡雛鴨發(fā)生鴨病毒性肝炎（Duck viral hepatitis,DVH）,致死率高達90%。DHAV-1感染雛鴨后引起多個臟器的細胞發(fā)生凋亡,特別是肝臟細胞的大量急性凋亡與特征性肝臟出血性壞死,給養(yǎng)鴨業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。內質網(wǎng)（endoplasmic reticulum,ER）是真核細胞的蛋白工廠,主要負責蛋白的正確折疊與加工,也是病毒復制的主要場所之一。在病毒復制過程中,會產(chǎn)生大量的病毒蛋白,當它們不能被正確的折疊修飾和及時輸出時,可啟動內質網(wǎng)應激反應（ER stress response,ERSR）,進而誘導未折疊蛋白反應（unfolded protein response,UPR）,恢復其穩(wěn)態(tài)。自噬發(fā)揮類似ERS的補充機制,可降解細胞中的蛋白質和廢物等,維持穩(wěn)態(tài)的細胞過程。ERS在許多病毒感染中發(fā)揮作用,不僅與病毒增殖和細胞凋亡有關,而且還可以調控細胞自噬水平。本研究主要針對DHAV-1感染后誘導的ERS及其介導的自噬、... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：168 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

ER的3條應激通路(Shenetal.,2004)

山東農業(yè)大學博士學位論文17圖1-2UPR分支圖及其與自噬的關系(Jhengetal.,2014)。Figure1-2UPRbranchmapanditsrelationshipwithautophagy注：紅色虛線箭頭表示由病毒感染引起的激活途徑的最終結果，例如細胞凋亡和自噬；而紅色實心箭頭表示UPR路徑Note:Reddashedarrowsindicatetheendresultsofactivationpathwayscausedbyviralinfections,suchasapoptosisandautophagy,whereasredsolidarrowindicatesUPRpathways研究表明通過基孔肯雅病毒（Chikungunyavirus,CHIKV）感染誘導的完全自噬誘導是由內質網(wǎng)和氧化應激途徑的獨立誘導介導的；敲低IRE1或使用ROS抑制劑N乙酰基-1-半胱氨酸抑制處理細胞也抑制自噬體的形成以及LC3-I向LC3-II的轉化，證明經(jīng)IRE1mRNA沉默和用N-乙酰基-1-半胱氨酸處理的細胞會抑制自噬體的形成（Joubertetal.,2012）。研究證實許多與UPR相關的轉錄因子調控Atg表達，ATF4的靶蛋白有LC3、Sequestosome1（p62/SQSTM）和ULK1（B"Chiretal.,2013;Milanietal.,2009;Pikeetal.,2013;Rouschopetal.,2010）；CHOP的靶蛋白有ATF5、LC3和p62/SQSTM1（B"Chiretal.,2013;Rouschopetal.,2010;Wangetal.,2014a）；ATF6的靶蛋白有死亡相關蛋白激酶1（DeathassociatedproteinKinase1,DAPK1）（Gadeetal.,2012）；C/EBPβ的靶蛋白有DAPK1、ATG4B和ULK1（Gadeetal.,2008;Guoetal.,2013;Maetal.,2011）；膽固醇調節(jié)元件結合蛋白（Sterolregulatoryelement-bindingproteins,SREBP2）對應的靶蛋白

DHAV-1感染誘導內質網(wǎng)應激反應的信號通路研究30分離。（6）數(shù)據(jù)庫搜索：運用Maxquant(v1.5.2.8)對二級質譜數(shù)據(jù)進行檢索。（7）生物信息學分析：GO分析、蛋白結構域、KEGG通路分析、亞細胞定位等。圖2-1蛋白質組測序流程Figure2-1Procedureofproteomicssequencing2.3.1樣品制備2.3.1.1細胞樣品的準備隨機制備并培養(yǎng)3批次DEF細胞，用10%完全培養(yǎng)基懸浮細胞并接種6cm細胞培養(yǎng)皿中，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞單層鋪滿達70%~90%左右，用PBS輕輕漂洗2次，加入病毒液（以感染復數(shù)（multiplicityofinfection,MOI）為2.0TCID50/細胞接種），37℃吸附2h，吸附結束后用PBS漂洗2次，換入2%的細胞維持液，繼續(xù)培養(yǎng)。同時，設不接種病毒的細胞組為陰性對照，其他處理同病毒感染組。感染48h時，分別收集DHAV-1感染組（簡稱為D）和未感染的DEF細胞(簡稱為N)。每組設立3個生物學重復。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]新型鴨肝炎病毒致病特性及感染鴨肝胰細胞凋亡的研究[D]. 胡薛英.中國農業(yè)大學 2005



本文編號：3523187