體細(xì)胞核移植技術(shù)在許多方面都有很大的應(yīng)用前景,但目前核移植效率還普遍很低,人們對(duì)核移植重編程機(jī)制了解的也還不夠全面。對(duì)母源因子的挖掘和研究可以增加人們對(duì)核移植重編程機(jī)制的認(rèn)識(shí),進(jìn)而會(huì)提高核移植效率,促進(jìn)核移植技術(shù)更廣泛的應(yīng)用。近幾年來(lái)隨著蛋白質(zhì)組技術(shù)的發(fā)展,人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多卵中的母源蛋白,但如何從眾多的母源因子中篩選出對(duì)胚胎發(fā)育,特別是對(duì)核移植重編程,有特殊作用的蛋白因子成為現(xiàn)在人們著重希望解決的問(wèn)題。在前期工作中,我們發(fā)現(xiàn)大部分的豬體外成熟培養(yǎng)33 h的卵母細(xì)胞（33O）已經(jīng)達(dá)到了核成熟,然而其核移植之后的克隆胚胎發(fā)育率卻顯著低于一般豬核移植所用的42h的成熟卵（42O）。這可能是因?yàn)?2O中含有更多的有利于核移植重編程的母源因子,這就為我們針對(duì)性的挖掘?qū)?xì)胞重編程和早期胚胎發(fā)育起重要作用的母源因子提供了一個(gè)契機(jī)。在本研究中,我們擬通過(guò)對(duì)豬33O和42O的蛋白質(zhì)組進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)33O和42O之間差異表達(dá)的蛋白,并試圖從中發(fā)現(xiàn)一些與核移植重編程有關(guān)的母源因子,從而希望增加人們對(duì)核移植重編程機(jī)制的了解。主要研究結(jié)果如下:（1）首先我們利用定量蛋白質(zhì)組學(xué)的經(jīng)典技術(shù)路線(xiàn)——2D-PAGE+... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 核移植簡(jiǎn)述
    1.2 核移植重編程機(jī)制
    1.3 母源因子與核移植重編程
    1.4 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑及配置
        2.1.4 主要生物信息學(xué)分析軟件及數(shù)據(jù)庫(kù)
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 33O和42O蛋白樣品制備
        2.2.2 蛋白質(zhì)分析膠電泳及圖像分析
        2.2.3 蛋白質(zhì)制備膠電泳及質(zhì)譜鑒定分析
        2.2.4 生物信息學(xué)分析
        2.2.5 Western blot
        2.2.6 體外胚胎操作（SCNT，PA，IVF）
        2.2.7 實(shí)時(shí)定量PCR
        2.2.8 免疫熒光檢測(cè)
        2.2.9 iPS細(xì)胞誘導(dǎo)
        2.2.10 堿性磷酸酶染色
        2.2.11 GSK126和GSK-J4藥物處理
        2.2.12數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 豬不同成熟時(shí)間MII期卵母細(xì)胞的差異蛋白譜的構(gòu)建
        3.1.1 豬體外成熟培養(yǎng)33h和42h的MII期卵母細(xì)胞的收集
        3.1.2 330和42O的差異蛋白的分離
        3.1.3 330和42O的差異蛋白的鑒定
        3.1.4 33O和42O的差異蛋白的生物信息學(xué)分析
    3.2 母源VIM蛋白在豬核移植重編程中的功能研究
        3.2.1 VIM在豬IVF和NT胚胎中的表達(dá)模式
        3.2.2 干擾母源VIM對(duì)豬克隆胚胎發(fā)育的影響
        3.2.3 母源VIM在核移植重編程中防止基因組損傷
    3.3 母源EZH2蛋白在豬核移植重編程中的功能研究
        3.3.1 干擾母源EZH2蛋白能夠提高豬克隆胚胎發(fā)育率
        3.3.2 豬早期克隆胚胎的H3K27me3水平高于IVF胚胎
        3.3.3 降低供體細(xì)胞PEF的H3K27me3水平能夠提高克隆胚胎的發(fā)育率
        3.3.4 降低早期胚胎中的H3K27me3水平能夠提高克隆胚胎的發(fā)育率
        3.3.5 在源頭細(xì)胞或早期重編程過(guò)程中降低H3K27me3水平能夠提高iPS誘導(dǎo)效率
4 討論
    4.1 33O和42O之間蛋白質(zhì)組的差異
    4.2 母源VIM在豬核移植重編程中的功能
    4.3 H3K27me3水平對(duì)豬克隆胚胎發(fā)育的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3357240