埃博拉病毒（EBOV）是一種高致病性病原,可導(dǎo)致人類和其他靈長(zhǎng)類高致死性的出血熱。歷史上最大的埃博拉暴發(fā)是2013到2016年發(fā)生在西非的流行,造成了將近30,000人感染,超過11,000人死亡。從2018年開始在剛果民主共和國(guó)（Democratic Republic of Congo、DRC）蔓延的疫情則導(dǎo)致了比西非暴發(fā)更高的病死率,盡管有超過30萬(wàn)人接種了疫苗,但感染人數(shù)仍已超過3,400人,死亡病例超過2,200例。面對(duì)大型暴發(fā)的接連出現(xiàn)以及特效藥物的缺失,人們亟需對(duì)埃博拉病毒進(jìn)行更多更深入的研究。然而,埃博拉病毒的研究必需在生物安全四級(jí)（Biosafety Level 4、BSL-4）實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行,導(dǎo)致研究進(jìn)度受到了嚴(yán)重限制。為了能在四級(jí)實(shí)驗(yàn)室之外進(jìn)行研究,科學(xué)家建立了多種反向遺傳學(xué)系統(tǒng)來模擬病毒生活周期的不同步驟,其中包括迷你基因組（Minigenome、MG）系統(tǒng)以及能夠被轉(zhuǎn)錄和復(fù)制的病毒樣顆粒（transcription-and replication-competent virus-like particle、trVLP）系統(tǒng)。但是,現(xiàn)有的反向遺傳學(xué)系統(tǒng)都依賴于多種質(zhì)... 

【文章來源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院上海巴斯德研究所)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：100 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．２?ＥＢＯＶ反向遺傳學(xué)系統(tǒng)??病續(xù)全長(zhǎng)ＲＮＡ以ｃＤＮＡ質(zhì)粒形式提供（ｒｇＺ），本身沒有感染性，可以在生物安全１級(jí)或??２級(jí)實(shí)驗(yàn)觀中操作

圖２．１Ａ、Ｂ）

＞＼Ｈｕｈ７－４Ｒ?－??Ｂ?ｃ?丄??１３０ｋＤａ－？?ＮＰ?＾??３４ｋＤａＪ￣?ＶＰ３５?￣￣—??３４ｋＤａ－?ＶＰ３０?５００ｂｐ－?？??４３ｋＤａ－＿＾＾＾?Ａｃｔｉｎ??Ｄ?Ｅ??｝：｜?廣?ｓ：：廣＼??３????３－Ｕ￣．￣，￣，￣，￣，￣，￣ｎ－??２?４?６?８１０１２?２４?４８７２?９６?１?２?３?４?７?１１?１５?１９??Ｈｏｕｒｓ?ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?Ｄａｙｓ?ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ??圖２．２?Ｈｕｈ７－４Ｐ細(xì)胞可以髙效支持ＭＧ的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄??ＣＡ）制備能表達(dá)ＮＰ、ＶＰ３５、ＶＰ３０以及Ｌ蛋白的Ｈｕｈ７－４Ｐ細(xì)胞的流程屈。ＣＢ）通過免疫印??跡襝測(cè)ＮＰ、ＶＰ３５以及ＶＰ３０蛋白的表逢；義ｙ?（Ｃ）通過戾轉(zhuǎn)：錄ＰＣＲ檢測(cè)Ｌ蛋白．ｍＲＮＡ的奢達(dá)??水平ｓ?ＣＤ、Ｅ）轉(zhuǎn)染了ＭＧｖＲＮＡ的Ｈｕｈ７－４Ｐ細(xì)胞橋參上辨中的ＧＬｕｃ活ｆ生，??Ｆｉｇｕｒｅ?２．２?Ｈｕｈ７－４Ｐ?ｃｅｌｌｓ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ?ｓｕｐｐｏｒｔ?ｍｉｎｉｇｅｎｏｍｅ?ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ??（Ａ）?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｏｃｏｌ?ｔｏ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ?Ｈｕｈ７－４Ｐ?ｃｅｌｌｓ?ｓｔａｂｌｙ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ?ＮＰ，?ＶＰ３５，?ＶＰ３０，?ａｎｄ?Ｌ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ．??（Ｂ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＮＰ，?ＶＰ３５，?ａｎｄ?ＶＰ３０?ｐｒｏｔｅｉｎｓ．?（Ｃ）?ＲＴ－ＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?Ｌ?ｇｅｎｅ??ｍＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．?（Ｄ?ａｎｄ?Ｅ）?ＧＬｕｃ?ａｃｔｉ


本文編號(hào)：3022964