細胞衰老是一種不可逆的細胞休眠狀態(tài),由多種機制驅動,如端粒縮短導致的復制衰竭、癌基因激活、基因毒性、營養(yǎng)和氧化應激等。這些機制通常在DNA損傷反應（DDR）累積的基礎上,導致腫瘤抑制因子p53的激活,繼而調控p21和p16等細胞周期依賴性激酶（CDK）抑制因子的表達。雖然細胞衰老最初被認為是一種與正常細胞老化相呼應的被動的細胞自主抗增殖程序,但人們越來越認識到細胞衰老在許多其他生理和病理過程中起著重要作用,包括腫瘤抑制、神經退行性病變和組織重塑。此外,由衰老細胞分泌蛋白改變導致的衰老相關分泌表型（SASP）還參與調節(jié)炎癥、組織微環(huán)境和年齡相關疾病。越來越多的非編碼RNA被發(fā)現參與調節(jié)細胞衰老。例如,長鏈非編碼RNA MIR31HG通過調節(jié)p16的表達來調節(jié)致癌基因誘導的細胞衰老,而HOTAIR通過DDR-p53-p21信號激活細胞衰老。此外,lncRNAOVAAL通過調節(jié)CDK抑制因子p27的表達來阻止細胞衰老。本實驗室在之前發(fā)現lncRNAGUARDIN在維持基因組穩(wěn)定性中起著重要作用。而且沉默GUARDIN可誘導某些腫瘤細胞發(fā)生,但其具體作用機制尚不清楚。Rapamycin（雷帕霉... 

【文章來源】：中國科學技術大學安徽省 211工程院校 985工程院校

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語
第1章 緒論
    1.1 細胞衰老的概述
        1.1.1 細胞衰老的發(fā)現
        1.1.2 誘發(fā)細胞衰老的因素
        1.1.3 細胞衰老的兩面性
        1.1.4 FOXO調控細胞衰老
        1.1.5 Rapamycin調控細胞衰老
    1.2 長鏈非編碼RNA的概述
        1.2.1 長鏈非編碼RNA的分類
        1.2.2 長鏈非編碼RNA的作用機制
        1.2.3 長鏈非編碼RNA調控細胞衰老
        1.2.4 長鏈非編碼RNA GUARDIN
第2章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 藥品和試劑盒
        2.1.3 抗體
        2.1.4 表達載體和質粒
        2.1.5 引物、分子探針和shRNA
    2.2 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 PCR（聚合酶鏈式反應）
        2.3.2 純化回收DNA
        2.3.3 限制性核酸內切酶酶切
        2.3.4 感受態(tài)細胞制備
        2.3.5 目的片段與載體的連接
        2.3.6 連接產物和質粒的轉化及驗證保種
        2.3.7 抽提質粒
        2.3.8 細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代及保種
        2.3.9 質粒轉染
        2.3.10 慢病毒包裝、感染細胞及細胞篩選
        2.3.11 細胞總RNA提取
        2.3.12 RNA逆轉錄
        2.3.13 實時熒光定量PCR（Real-time quantitative PCR,qPCR）
        2.3.14 蛋白質樣品制備和定量
        2.3.15 蛋白質免疫印跡技術（Western blotting）
        2.3.16 考馬斯亮藍染色
        2.3.17 RNA體外轉錄
        2.3.18 RNA免疫印跡技術（Northern blotting）
        2.3.19 RNA熒光原位雜交（FISH）
        2.3.20 RNA pulldown
        2.3.21 IP（免疫共沉淀技術）
        2.3.22 RIP（RNA免疫共沉淀技術）
        2.3.23 CHIP（染色質免疫共沉淀）
        2.3.24 雙熒光素酶報告基因實驗
        2.3.25 細胞基因組提取
        2.3.26 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色
        2.3.27 酶聯免疫吸附技術（Elisa）
        2.3.28 免疫熒光（IF）
        2.3.29 細胞核質分離
        2.3.30 RNA測序
        2.3.31 哺乳動物雙雜交系統
        2.3.32 數據處理和分析
第3章 實驗結果與分析
    3.1 GUARDIN抑制細胞衰老
    3.2 GUARDIN通過轉錄抑制p21調控細胞衰老
    3.3 GUARDIN促進LRP130/PGC1α相互作用
    3.4 LRP130/PGC1α間接轉錄調控p21
    3.5 GUARDIN通過FOXO4調控p21
    3.6 LRP130/PGC1α直接轉錄調控FOXO4
    3.7 GUARDIN-FOXO4信號軸獨立于BARD1、BRCA1和miR-23a
    3.8 Rapamycin通過轉錄因子FOSL2調控GUARDIN
第4章 實驗討論
    4.1 討論與總結
    4.2 創(chuàng)新點
    4.3 研究不足與展望
參考文獻
附錄1 響應rapamycin的轉錄因子信息
附錄2 人體組織中GUARDIN、LRP130和FOXO4相關性
致謝
在讀期間發(fā)表的學生論文與取得的其他研究成果



本文編號：2984349