本文關(guān)鍵詞：提高體外成熟卵母細(xì)胞質(zhì)量研究：抑制GVBD的后作用及體外成熟系統(tǒng)優(yōu)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：PARTI:通過抑制卵母細(xì)胞GVBD,增加胞質(zhì)成熟時間來提高體外成熟卵母細(xì)胞質(zhì)量的方法很少有成功的,主要由于缺乏對GVBD抑制期間發(fā)生分子事件了解。這方面的報道對研究卵母細(xì)胞GV期間基因表達(dá)調(diào)控也有重要借鑒意義。我們研究了不同物種間GVBD抑制對減數(shù)分裂進(jìn)程后作用,以及涉及信號通路。我們證明,ROS抑制以后,小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程變慢,豬卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程變快。抑制期間,豬卵母細(xì)胞Cyclin B量逐漸增加,而小鼠卵母細(xì)胞Cyclin B量先降低后緩慢升高。在小鼠和豬上,(a)有活性CDC2A變化和Cyclin B變化類似,無活性CDC2A都是逐漸減少；(b)抑制期間添加CHX后,Cyclin B和有活性CDC2A都降低到最低,卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程顯著變慢；(c)抑制期間添加釩酸鈉使卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程變慢,添加EGF使進(jìn)程加快,但都不影響Cyclin B變化。因此,ROS抑制卵母細(xì)胞3VBD期間,EGF能促進(jìn)前MPF向MPF轉(zhuǎn)化,加速減數(shù)分裂進(jìn)程。小鼠和豬卵母細(xì)胞抑制后減數(shù)分裂進(jìn)程不同主要由于Cyclin B變化不同造成的,在前MPF向MPF轉(zhuǎn)化和EGF信號通路方面沒有差異。PART II:大鼠卵母細(xì)胞具有自發(fā)激活的特性,使大鼠體細(xì)胞核移植克隆非常困難,體外成熟卵母細(xì)胞自發(fā)激活比例顯著低于體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞。關(guān)于大鼠卵母細(xì)胞研究主要集中在體內(nèi),不管是孤雌激活后發(fā)育還是體外受精后發(fā)育,關(guān)于體外成熟卵母細(xì)胞的研究很少,受精后有活體出生的報道更少。我們以成熟199為培養(yǎng)液,添加胱氨酸半胱胺,并且與卵丘共培養(yǎng)后顯著改善體外成熟卵母細(xì)胞質(zhì)量。卵母細(xì)胞孤雌激活和體外受精后發(fā)育能力都達(dá)到體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞水平,將得到2-Cell胚胎移植后,胎兒出生率與體內(nèi)組無顯著差異。改善體外培養(yǎng)條件后,卵母細(xì)胞核進(jìn)程和皮質(zhì)顆粒分布變化與體內(nèi)組更相近；卵母細(xì)胞抵抗氧化應(yīng)激能力提高,ROS水平降低,GSH含量提高；促進(jìn)發(fā)育相關(guān)基因表達(dá),最終顯著改善卵母細(xì)胞胞質(zhì)成熟質(zhì)量。因此,我們建立一個比較好的大鼠體外成熟系統(tǒng),為將來進(jìn)一步研究大鼠體外成熟卵母細(xì)胞特性及應(yīng)用奠定了很好基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：卵母細(xì)胞 GVBD 后作用 MPF 體外成熟 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q492
【目錄】：

• 中文摘要10-11
• Abstract11-13
• PARTⅠ 卵母細(xì)胞GVBD抑制對減數(shù)分裂進(jìn)程后作用13-39
• 1 前言13-25
• 1.1 減數(shù)分裂恢復(fù)調(diào)控13-17
• 1.1.1 MPF與減數(shù)分裂13-15
• 1.1.2 MAPK與減數(shù)分裂15-17
• 1.2 不同抑制劑抑制減數(shù)分裂恢復(fù)17-20
• 1.2.1 蛋白磷酸化抑制劑17-18
• 1.2.2 蛋白質(zhì)合成抑制劑CHX18-19
• 1.2.3 提高卵母細(xì)胞內(nèi)cAMP水平19-20
• 1.3 抑制減數(shù)分裂恢復(fù)對卵母細(xì)胞影響20-23
• 1.3.1 核進(jìn)程變化20-21
• 1.3.2 蛋白和mRNA變化21-23
• 1.4 EGF對減數(shù)分裂作用23
• 1.5 本文主要研究內(nèi)容23-25
• 2 材料與方法25-28
• 2.1 主要試劑及配制25-26
• 2.2 實驗動物飼養(yǎng)及處理26
• 2.3 小鼠和豬卵母細(xì)胞收集26
• 2.4 卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)26
• 2.5 減數(shù)分裂進(jìn)程觀察26-27
• 2.6 Western雜交27
• 2.7 抗體選擇27
• 2.8 數(shù)據(jù)分析27-28
• 3 結(jié)果28-35
• 3.1 ROS抑制后,加速豬卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程,減緩小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程28-29
• 3.2 Western blot分析小鼠和豬卵母細(xì)胞抑制后cyclin B,總CDC2A,無活性和有活性P-CDC2A變化】29-30
• 3.3 抑制期間MPF組分變化與減數(shù)分裂進(jìn)程的關(guān)系30-31
• 3.4 抑制過程中添加釩酸鈉減慢小鼠和豬卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程31-33
• 3.5 抑制期間通過添加EGF促進(jìn)前MPF向MPF轉(zhuǎn)化加速小鼠和豬卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程33
• 3.6 抑制期間EGF對小鼠和豬卵母細(xì)胞cyclin B,無活性和有活性P-CDC2A影響33-35
• 4 討論35-38
• 4.1 抑制過程中cyclin B蛋白變化35
• 4.2 抑制過程中前MPF向MPF轉(zhuǎn)化35-36
• 4.3 抑制過程中添加EGF作用36-38
• 5 結(jié)論38-39
• PARTⅡ大鼠卵母細(xì)胞體外成熟系統(tǒng)優(yōu)化39-71
• 1 前言39-54
• 1.1 大鼠卵母細(xì)胞自發(fā)激活39-41
• 1.1.1 自發(fā)激活的影響因素40
• 1.1.2 自發(fā)激活的判定標(biāo)準(zhǔn)40-41
• 1.1.3 抑制大鼠卵母細(xì)胞自發(fā)激活的方法41
• 1.1.4 自發(fā)激活對胚胎發(fā)育及核移植克隆的影響41
• 1.2 卵母細(xì)胞體外成熟41-43
• 1.2.1 細(xì)胞質(zhì)成熟和核成熟42
• 1.2.2 卵母細(xì)胞體外成熟42-43
• 1.3 影響體外培養(yǎng)成熟的因素43-46
• 1.3.1 體外成熟的培養(yǎng)液43
• 1.3.2 卵丘細(xì)胞的影響43-44
• 1.3.3 氧化應(yīng)激對卵母細(xì)胞體外成熟的影響44
• 1.3.4 卵泡直徑與卵母細(xì)胞直徑對卵母細(xì)胞體外成熟的影響44-45
• 1.3.5 動物年齡的影響45-46
• 1.4 提高體外成熟的卵母細(xì)胞的質(zhì)量方法46-49
• 1.4.1 抑制體外自發(fā)成熟46-47
• 1.4.2 卵丘共培養(yǎng)47-48
• 1.4.3 添加胱氨酸/半胱胺48-49
• 1.4.4 添加外源性卵分泌生長因子49
• 1.5 卵母細(xì)胞體外成熟質(zhì)量的檢測指標(biāo)49-53
• 1.5.1 卵母細(xì)胞的形態(tài)學(xué)檢測49-50
• 1.5.2 減數(shù)分裂進(jìn)程與卵母細(xì)胞體外成熟50
• 1.5.3 卵母細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器檢測50-51
• 1.5.4 體外胚胎發(fā)育51-52
• 1.5.5 卵母細(xì)胞胞質(zhì)中谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平52
• 1.5.6 發(fā)育相關(guān)基因檢測52-53
• 1.6 本文主要研究內(nèi)容53-54
• 2 材料與方法54-59
• 2.1 主要試劑及配制54
• 2.2 實驗動物及卵母細(xì)胞獲取54-55
• 2.3 卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)55
• 2.4 卵母細(xì)胞孤雌激活及胚胎培養(yǎng)55
• 2.5 卵母細(xì)胞體外受精55-56
• 2.6 卵母細(xì)胞自發(fā)激活判定56
• 2.7 胚胎移植56
• 2.7.1 制作不育雄鼠的輸精管切除術(shù)56
• 2.7.2 受體母鼠準(zhǔn)備及胚胎移植56
• 2.8 核進(jìn)程觀察56-57
• 2.9 皮質(zhì)顆粒染色57
• 2.10 卵母細(xì)胞內(nèi)ROS水平的檢測57
• 2.11 GSH水平檢測57-58
• 2.12 發(fā)育相關(guān)基因檢測58
• 2.13 數(shù)據(jù)分析58-59
• 3 結(jié)果59-67
• 3.1 不同成熟條件對卵母細(xì)胞核進(jìn)程影響59
• 3.2 不同成熟條件對卵母細(xì)胞自發(fā)激活影響59-60
• 3.3 不同成熟條件對卵母細(xì)胞孤雌激活后胚胎發(fā)育影響60-61
• 3.4 不同成熟條件對卵母細(xì)胞體外受精后胚胎發(fā)育影響61-62
• 3.4.1 體外受精時獲能液摸索61
• 3.4.2 體外受精時獲能時間確定61-62
• 3.4.3 不同成熟條件對大鼠體外受精后胚胎發(fā)育能力影響62
• 3.5 不同成熟條件對胚胎著床后發(fā)育影響62-63
• 3.6 不同成熟條件對卵母細(xì)胞ROS水平影響63
• 3.7 不同成熟條件對卵母細(xì)胞谷胱甘肽水平影響63-64
• 3.8 不同成熟條件對卵母細(xì)胞成熟過程中皮質(zhì)顆粒分布影響64-65
• 3.9 不同成熟條件對發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)的影響65-67
• 4 討論67-70
• 4.1 添加胱氨酸、半胱胺及卵丘共培養(yǎng)對胞質(zhì)成熟影響67
• 4.2 大鼠卵母細(xì)胞體外成熟后胚胎移植67-68
• 4.3 胞質(zhì)成熟相關(guān)指標(biāo)68-69
• 4.4 大鼠體外受精條件優(yōu)化69-70
• 5 結(jié)論70-71
• References of part Ⅰ71-82
• References of part Ⅱ82-96
• 致謝96-97
• Publication List97

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9 包華瓊;;卵母細(xì)胞冷凍保存損傷機(jī)制的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報;2009年S1期

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1 李向臣;姚雅馨;趙倩君;浦亞斌;王義鵬;關(guān)偉軍;馬月輝;;玻璃化冷凍對卵母細(xì)胞紡錘體分布的影響[A];第十二次全國畜禽遺傳標(biāo)記研討會論文集[C];2010年

2 戴建軍;吳彩鳳;張廷宇;張樹山;徐利;張德福;;三種冷凍方法對豬MⅡ期卵母細(xì)胞線粒體分布和損傷的影響[A];上海市制冷學(xué)會2013年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

3 劉姍;陳子江;李媛;高選;楊慧軍;顏軍昊;;線粒體分布變化與人卵母細(xì)胞體外成熟的關(guān)系初探[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

4 王磊;司遠(yuǎn)彬;邵小光;;卵母細(xì)胞成熟障礙患者分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

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7 金帆;;卵母細(xì)胞的體外成熟[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會第八次學(xué)術(shù)年會暨國家級繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2008年

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1 記者 劉霞;美實驗證實人類存在卵原干細(xì)胞[N];科技日報;2012年

2 記者 許琦敏;出生后卵母細(xì)胞還能不斷產(chǎn)生[N];文匯報;2009年

3 楊淑娟;美發(fā)現(xiàn)近期骨髓細(xì)胞不能形成卵母細(xì)胞[N];中國醫(yī)藥報;2006年

4 美訊;使用冷凍卵母細(xì)胞可能降低體外受精成功率[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2006年

5 記者 何德功;日本用卵母細(xì)胞成功培育出幼鼠[N];新華每日電訊;2004年

6 記者 劉霞;雌性老鼠出生后仍產(chǎn)卵母細(xì)胞[N];科技日報;2009年

7 ;人卵母細(xì)胞的低溫貯藏[N];中國醫(yī)藥報;2003年

8 記者 王丹 通訊員 魏書明 仰東萍;單個卵母細(xì)胞高精度全基因測序完成[N];健康報;2013年

9 付東紅 馬鳳琴;我國第一個“三凍”男嬰誕生[N];健康報;2006年

10 劉濤 董奇光;我省成功實施首例凍融卵母細(xì)胞試管嬰兒手術(shù)[N];太原日報;2012年

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1 劉雪青;LH誘導(dǎo)小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)過程中相關(guān)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

2 劉帥;豬卵胞質(zhì)注射及單精子胞質(zhì)內(nèi)注射介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因方法研究[D];廣西大學(xué);2015年

3 任亮;豬MⅡ期卵母細(xì)胞玻璃化冷凍的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 馬汝鈞;Rab蛋白在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的作用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 劉美菊;白藜蘆醇在高齡小鼠和人卵母細(xì)胞成熟中的作用研究[D];山東大學(xué);2016年

6 焦光忠;提高體外成熟卵母細(xì)胞質(zhì)量研究：抑制GVBD的后作用及體外成熟系統(tǒng)優(yōu)化[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 李海軍;牛卵丘—卵母細(xì)胞復(fù)合體凋亡發(fā)生和調(diào)控與其發(fā)育潛能關(guān)系研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2008年

8 李青;葡萄糖抑制小鼠卵母細(xì)胞老化的機(jī)理及小鼠卵母細(xì)胞的體外保存[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

9 劉娜;丙酮酸調(diào)控小鼠卵母細(xì)胞排卵后老化的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

10 陶勇;一氧化氮與豬卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

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1 周洪彬;卵母細(xì)胞成熟抑制劑對豬卵母細(xì)胞成熟的影響[D];西南大學(xué);2006年

2 盧曉麗;鎘抑制卵母細(xì)胞MI期進(jìn)程中MPF的活性及其相關(guān)基因的表達(dá)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 沈江鵬;不同形態(tài)卵母細(xì)胞與不同濃度精子組合對受精及早期胚胎發(fā)育的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

4 張光利;小鼠死后滯留對卵巢卵母細(xì)胞存活與成熟的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

5 程立立;卵母細(xì)胞分泌因子在人MⅡ卵母細(xì)胞的卵丘顆粒細(xì)胞中的表達(dá)及其與卵母細(xì)胞發(fā)育潛能關(guān)系的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 岑文;豬卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)及孤雌胚胎體外培養(yǎng)的研究[D];陜西師范大學(xué);2015年

7 邵麗;卵母細(xì)胞體外成熟過程中卵丘細(xì)胞上基因表達(dá)譜變化及其生物學(xué)意義[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號：267684