本文關(guān)鍵詞：動(dòng)物源大腸桿菌對(duì)乙酰甲喹和氟苯尼考的敏感性折點(diǎn)及分子耐藥機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2015年

動(dòng)物源大腸桿菌對(duì)乙酰甲喹和氟苯尼考的敏感性折點(diǎn)及分子耐藥機(jī)制研究

何濤  

【摘要】：抗菌藥物敏感性判定標(biāo)準(zhǔn)(折點(diǎn))是開展病原菌耐藥性檢測(cè),確定其耐藥率、耐藥水平的重要技術(shù)標(biāo)準(zhǔn),目前世界上比較權(quán)威的折點(diǎn)制定組織有美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)和歐洲抗菌藥物敏感性試驗(yàn)委員會(huì)(European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing, EUCAST),而我國沒有設(shè)立制定折點(diǎn)的機(jī)構(gòu),因此參考的主要是國外的標(biāo)準(zhǔn)。國外標(biāo)準(zhǔn)對(duì)一些中國自主研制的新獸藥比如乙酰甲喹沒有建立敏感性折點(diǎn)；同時(shí)國內(nèi)獸醫(yī)臨床的某些常用劑型,比如氟苯尼考粉劑針對(duì)大腸桿菌感染,國外的標(biāo)準(zhǔn)也沒有涉及。乙酰甲喹和氟苯尼考是國內(nèi)獸醫(yī)臨床使用較為普遍的抗菌藥物,在控制動(dòng)物的大腸桿菌感染性疾病發(fā)面發(fā)揮了巨大作用,而敏感性折點(diǎn)的缺乏嚴(yán)重影響了這兩種藥物的耐藥性監(jiān)測(cè)工作的開展。針對(duì)以上問題,本研究將參照國外建立折點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)流程,系統(tǒng)調(diào)查國內(nèi)動(dòng)物源大腸桿菌對(duì)乙酰甲喹和氟苯尼考的敏感性表型及分子耐藥機(jī)制,在此基礎(chǔ)上設(shè)定兩種藥物針對(duì)大腸桿菌的野生型折點(diǎn),通過動(dòng)物模型初步探討與臨床效力最為相關(guān)的PK-PD參數(shù),以期為PK-PD折點(diǎn)的制定提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。 本研究收集了70年代、80年代、90年代、2001年-2013年國內(nèi)不同地區(qū)不同動(dòng)物來源的1123株大腸桿菌,通過微量肉湯稀釋法測(cè)試了乙酰甲喹和氟苯尼考對(duì)這些菌株的最小抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration, MIC),通過體外藥效學(xué)試驗(yàn)研究了這兩種藥物對(duì)致病性大腸桿菌的最小殺菌濃度(Minimum Bactericidal Concentration, MBC)、防突變濃度(Mutant Prevention Concentration, MPC)、抗菌后效應(yīng)(Post-antimicrobial effect, PAE)和體外殺菌曲線。結(jié)果表明乙酰甲喹對(duì)大腸桿菌呈現(xiàn)濃度依賴性的殺菌作用(MBC=1-2MIC),氟苯尼考對(duì)大腸桿菌呈現(xiàn)濃度依賴性的抑菌作用(MBC=4-16MIC)兩種藥物對(duì)大腸桿菌都有一定的體外PAE,盡管它們的突變選擇窗(Mutant Selection Window, MSW)較寬。70年代到2013年之間,國內(nèi)動(dòng)物源大腸桿菌對(duì)乙酰甲喹和氟苯尼考的敏感性呈下降趨勢(shì),低敏感菌株的比例逐年上升。雞源大腸桿菌相對(duì)豬源大腸桿菌對(duì)乙酰甲喹敏感,而兩種動(dòng)物來源的大腸桿菌對(duì)氟苯尼考的敏感性情況比較接近。通過分別繪制兩種藥物對(duì)1123株大腸桿菌MIC分布的直方圖,運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定了乙酰甲喹對(duì)大腸桿菌的野生型折點(diǎn)COWT為32μg/mL,氟苯尼考對(duì)大腸桿菌的野生型折點(diǎn)COWT為16μg/mL。 通過檢測(cè)這些菌株中的喹乙醇耐藥基因oqxAB和相關(guān)氟苯尼考耐藥基因(fexA、fexB、floR和cfr),發(fā)現(xiàn)oqxAB和floR基因分別是介導(dǎo)大腸桿菌對(duì)乙酰甲喹和氟苯尼考低敏感表型的主要基因,分別占MIC≥64μg/mL大腸桿菌的94.4%和MIC≥32μg/mL大腸桿菌的93.7%,并且基因的檢出率隨著年代的推移呈上升趨勢(shì)。首次在一株豬源大腸桿菌中檢測(cè)到了cfr基因,檢出率為0.09%,cfr基因定位于質(zhì)粒上,可介導(dǎo)大腸桿菌對(duì)氟苯尼考的低敏感表型。耐藥基因的檢測(cè)結(jié)果與我們制定的CCWT滿足耐藥表型和基因型的一致。通過基因測(cè)序,發(fā)現(xiàn)同一動(dòng)物來源不同大腸桿菌菌株或不同動(dòng)物來源的大腸桿菌中oqxAB和floR基因的DNA同源性都很高,分別達(dá)到了99.2%和99.6%以上,說明大腸桿菌中這兩種基因很少發(fā)生變異。通過研究oqxAB基因和cfr基因在大腸桿菌中的基因環(huán)境發(fā)現(xiàn),這些基因的兩側(cè)都有方向相同的IS26,形成了一個(gè)復(fù)合轉(zhuǎn)座子結(jié)構(gòu)。這種復(fù)合轉(zhuǎn)座子結(jié)構(gòu)不能穩(wěn)定存在,可以通過兩側(cè)的IS26發(fā)生同源重組,從而將oqxAB和cfr基因以環(huán)狀中間體的形式從質(zhì)�；蛉旧w上游離下來,加大了耐藥基因傳播的風(fēng)險(xiǎn)。 通過構(gòu)建粒細(xì)胞減少小鼠大腿肌肉感染模型研究了乙酰甲喹注射劑對(duì)小鼠大腸桿菌感染的PK-PD同步關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與臨床效力最為相關(guān)的PK-PD參數(shù)為AUC/MIC,并且當(dāng)AUC/MIC分別為0.85h和4.3h時(shí),可以達(dá)到抑菌或殺菌效應(yīng)。通過豬腸瘺和血清半體內(nèi)模型研究氟苯尼考粉劑對(duì)豬大腸桿菌感染的PK-PD同步關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)豬腸道環(huán)境復(fù)雜,所構(gòu)建的豬腸瘺模型并不能考察氟苯尼考對(duì)大腸桿菌的半體外殺菌效力,故只檢測(cè)了氟苯尼考在回腸中的藥物濃度變化,結(jié)果表明氟苯尼考在豬回腸中存在時(shí)間較短,3h后基本檢測(cè)不到原藥。使用Hill模型模擬豬血清半體內(nèi)氟苯尼考對(duì)大腸桿菌的PK-PD關(guān)系,當(dāng)AUC24h/MIC分別為15.79h和49.49h時(shí),能夠達(dá)到抑菌和殺菌效應(yīng)。考慮到野生型大腸桿菌氟苯尼考MIC的分布情況(MIC≤16μg/mL),目前一天給藥兩次的方案可能對(duì)部分野生型菌株引起的系統(tǒng)感染起不到治療效果(殺菌效應(yīng))。 綜上所述,國內(nèi)動(dòng)物源大腸桿菌對(duì)乙酰甲喹和氟苯尼考的敏感性隨著年代推移呈現(xiàn)下降趨勢(shì),介導(dǎo)兩種藥物低敏感表型的主要基因分別為oqxAB和floR,使用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分別建立了乙酰甲喹和氟苯尼考對(duì)大腸桿菌的COWT。研究得到了乙酰甲喹治療小鼠大腸桿菌感染的PK-PD靶值為AUC/MIC≥4.3h,初步探討了氟苯尼考治療大腸桿菌引起的豬腸道感染和系統(tǒng)感染的PK-PD關(guān)系并給出用藥建議。該研究結(jié)果為最終敏感性折點(diǎn)的制定提供了理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持,有利于下一步耐藥性監(jiān)測(cè)工作的進(jìn)行,從而最終為耐藥性的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供科學(xué)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.61
【目錄】：

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7 陸晨薇;李引乾;關(guān)永娟;張煜波;白東英;苗小樓;熊永潔;;乙酰甲喹在試驗(yàn)性肝功能損害家兔體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年12期

8 杜子明;楊林洲;李淑娟;王海珍;別彩琴;劉玉琴;;雞乙酰甲喹中毒的診斷和防制[J];畜牧獸醫(yī)雜志;2008年01期

9 劉桂蘭;夏雪林;仝玉慧;劉愛玲;;乙酰甲喹性質(zhì)、毒性與替代藥物[J];中國獸藥雜志;2011年08期

10 鄒榮婕;徐英江;劉京熙;宮向紅;李佳蔚;劉慧慧;田秀慧;張秀珍;;乙酰甲喹在鯉魚肌肉組織中的殘留消除規(guī)律研究[J];中國農(nóng)學(xué)通報(bào);2012年29期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 司紅彬;曾振靈;劉迎春;賀利民;丁煥中;楊帆;;乙酰甲喹在豬體內(nèi)的代謝研究[A];第九屆全國藥物和化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

2 司紅彬;楊帆;劉迎春;孫永學(xué);丁煥中;曾振靈;;乙酰甲喹對(duì)鼠的毒性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物毒物學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

3 郭永勝;田麗芳;閆永平;;雞乙酰甲喹中毒的診治[A];2010畜牧業(yè)與低碳經(jīng)濟(jì)科技論文集[C];2010年

4 郭萍;楊強(qiáng);章厲劼;周藝林;;乙酰甲喹標(biāo)準(zhǔn)修訂商榷[A];首屆中國獸藥大會(huì)動(dòng)物藥品學(xué)暨中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物藥品學(xué)分會(huì)2008學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

5 母培強(qiáng);劉菁;唐先青;歐陽滿;蔣珺;吳駿;鄧詣群;;乙酰甲喹的細(xì)胞毒性及其羰基還原和羥化代謝[A];全國動(dòng)物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

6 王旭;Ihsan Awais;黃先菊;黃玲利;袁宗輝;;乙酰甲喹的毒理學(xué)研究[A];科技引領(lǐng)產(chǎn)業(yè)、支撐跨越發(fā)展——第六屆湖北科技論壇論文集萃[C];2011年

7 劉迎春;丁煥中;曾振靈;;乙酰甲喹對(duì)肉雞的急性和亞急性毒性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物毒物學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

8 張嘉慧;劉雅紅;;乙酰甲喹的檢測(cè)方法及其在雞體內(nèi)的消除規(guī)律[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文與摘要集[C];2006年

9 李華岑;臧合英;徐銀鳳;班付國;;乙酰甲喹注射液紫外鑒別探討[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物藥品學(xué)分會(huì)第四屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨2011學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

10 劉迎春;司紅彬;丁煥中;陳杖榴;曾振靈;;高效液相色譜-電噴霧離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜法鑒定乙酰甲喹在雞體內(nèi)代謝物結(jié)構(gòu)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第十次研討會(huì)論文摘要集[C];2009年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 海安縣畜牧獸醫(yī)站 倪俊兵 程素萍 海安縣孫莊鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 張加純;[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報(bào);2007年

2 上海恒豐強(qiáng)動(dòng)物藥業(yè)有限公司技術(shù)部 高懷濤;[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 AWAIS IHSAN;乙酰甲喹臨床前毒理學(xué)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 何濤;動(dòng)物源大腸桿菌對(duì)乙酰甲喹和氟苯尼考的敏感性折點(diǎn)及分子耐藥機(jī)制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 陸晨薇;乙酰甲喹在實(shí)驗(yàn)性肝和腎功能損害家兔體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

2 尹伏軍;氚標(biāo)乙酰甲喹的合成及其在動(dòng)物體內(nèi)的處置研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 吳敬超;乙酰甲喹鈉米乳的制備及藥效研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

4 黃勇旗;乙酰甲喹在山羊和綿羊體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及其抗菌后效應(yīng)研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

5 傅堅(jiān)英;脫二氧喹賽多、脫二氧乙酰甲喹抗體制備及酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)方法的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 楊春輝;喹噁啉類對(duì)腎上腺皮質(zhì)醛固酮合成酶表達(dá)調(diào)控的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：動(dòng)物源大腸桿菌對(duì)乙酰甲喹和氟苯尼考的敏感性折點(diǎn)及分子耐藥機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：163590