本文關鍵詞：cAMP調控小鼠卵母細胞第一次減數(shù)分裂和原始卵泡形成，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國農業(yè)大學》 2015年

cAMP調控小鼠卵母細胞第一次減數(shù)分裂和原始卵泡形成

王怡婧  

【摘要】：在雌性哺乳動物的生殖活動中,卵母細胞與體細胞互作形成特殊的卵泡結構,并以卵泡為基本的生殖單位。不同于青春期之后才開始進入減數(shù)分裂并持續(xù)完成減數(shù)分裂活動的精母細胞,卵母細胞早在胚胎期形成原始卵泡前便進入減數(shù)分裂,并且被阻滯在第一次減數(shù)分裂前期雙線期的核網(wǎng)期；與此同時,卵母細胞被卵巢內的體細胞包裹形成原始卵泡,建立原始卵泡庫。原始卵泡庫作為雌性哺乳動物一生唯一的卵泡來源,其形成與數(shù)量對于雌性動物的生殖能力至關重要。目前人類中發(fā)現(xiàn)的許多不孕癥以及雌性動物繁殖率下降都與卵母細胞減數(shù)分裂異常、原始卵泡庫建立失常密切相關,因此研究卵母細胞的減數(shù)分裂進程及原始卵泡庫的建立具有重要意義。 第二信使環(huán)腺苷酸(cyclic AMP, cAMP)是目前已知的維持出生后卵母細胞長期減數(shù)分裂前期-中期阻滯的關鍵因子,但cAMP是否參與調控原始卵泡形成前的卵母細胞早期減數(shù)分裂進程及原始卵泡庫建立還不清楚,因此,針對這一系列的科學問題,我們開展了本論文的研究。 研究發(fā)現(xiàn),卵巢中的cAMP含量隨著減數(shù)分裂的進程上升,在卵母細胞進入雙線期時達到高峰,隨后維持在較高水平直至原始卵泡庫建立。隨后對腺苷酸環(huán)化酶(Adcy)的檢測表明Adcy2是卵巢這個時期主要表達的cAMP合成酶,表明卵巢具有合成cAMP的能力。同時,免疫熒光定位的結果表明Adcy2主要表達于卵母細胞。 為了驗證卵母細胞內cAMP的功能,我們通過體外添加Adcy的廣譜性抑制劑MDL-12,330來培養(yǎng)16.5dpc的卵巢,發(fā)現(xiàn)加藥組中進入雙線期和核網(wǎng)期的卵母細胞明顯少于對照組,說明cAMP調控了卵母細胞的減數(shù)分裂進程。當添加間隙連接的阻斷劑CBX培養(yǎng)卵巢時,卵母細胞的減數(shù)分裂進程不受影響,提示調控卵母細胞減數(shù)分裂進程的cAMP是由卵母細胞自身合成的。隨后我們檢測了聯(lián)會復合體蛋白SYCP1的解離和降解情況,發(fā)現(xiàn)SYCP1可能是cAMP調控減數(shù)分裂進程的靶蛋白。 為了探索減數(shù)分裂進程與原始卵泡庫建立的關系,我們檢測了添加MDL-12,330培養(yǎng)的卵巢中與卵母細胞發(fā)育及卵泡生成相關基因的表達情況,發(fā)現(xiàn)這些基因表現(xiàn)出不同程度的變化,提示加藥組中卵巢發(fā)育異常。隨后我們檢測了原始卵泡庫的建立情況,發(fā)現(xiàn)加藥組的原始卵泡數(shù)量明顯少于對照組,提示這些缺失cAMP、無法正常進入核網(wǎng)期的卵母細胞不能正常地形成原始卵泡。最后,利用原位染色體核相觀察的方法,進一步發(fā)現(xiàn)在生理條件下,核網(wǎng)期的進入對于原始卵泡的形成是非常重要的。 本論文的研究證明cAMP是卵母細胞第一次減數(shù)分裂及卵泡發(fā)生的重要調控因子。此前對這兩者的研究多集中在各自特異性表達蛋白的功能上,而對兩者關系的研究較少。本論文的研究不僅發(fā)現(xiàn)了cAMP對卵母細胞第一次減數(shù)分裂雙線期和核網(wǎng)期的調控作用、對原始卵泡庫建立的作用,同時還發(fā)現(xiàn)了卵母細胞核網(wǎng)期阻滯與原始卵泡形成之間的關系,本論文對于闡明卵母細胞第一次減數(shù)分裂的內在調控機制和原始卵泡庫建立的分子機理具有重要的科學意義。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：中國農業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：Q954.43
【目錄】：

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