本文選題：細(xì)胞衰老　切入點(diǎn)：Bclaf1　出處：《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)是細(xì)胞應(yīng)對外來或內(nèi)源壓力時(shí)的一系列應(yīng)答反應(yīng),對于細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的維持和防止細(xì)胞癌變起到了關(guān)鍵的作用。調(diào)控信號通路的關(guān)鍵因素是相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子,其含量、活性、修飾直接決定了相關(guān)下游基因的轉(zhuǎn)錄并最終決定細(xì)胞的命運(yùn)。轉(zhuǎn)錄因子Bclaf1是一個(gè)功能十分重要的蛋白,與器官發(fā)育、腫瘤發(fā)生、細(xì)胞凋亡密切相關(guān),然而關(guān)于其調(diào)控和功能的研究還十分缺乏。我們的研究發(fā)現(xiàn)Bclaf1參與到了低劑量、長時(shí)間DNA損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老(TIS)和低氧脅迫這兩種細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)中。課題分為兩部分對具體分子機(jī)制進(jìn)行了探討。課題第一部分內(nèi)容研究的是Bclaf1在TIS中的作用及機(jī)制。實(shí)驗(yàn)建立了化療藥物Doxorubicin誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老(TIS)體系,發(fā)現(xiàn)了 Bclaf1在其中起到了重要作用:本研究通過Western Blot和熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)Bclaf1在TIS中會發(fā)生明顯上調(diào);RNAi沉默細(xì)胞內(nèi)源性Bclaf1后,細(xì)胞衰老水平會顯著降低。為探索Bclaf1上調(diào)機(jī)制,利用siRNA敲低DNA損傷應(yīng)答的一系列相關(guān)分子,發(fā)現(xiàn)Bclaf1的上調(diào)依賴于ATM/Nemo/NF-κB信號通路;熒光素酶報(bào)告基因及染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(ChIP)也進(jìn)一步證明了 Bclaf1受到了 NF-κB家族p65和c-Rel直接轉(zhuǎn)錄調(diào)控。另一方面,為檢測Bclaf1在誘導(dǎo)細(xì)胞衰老中發(fā)揮的作用,我們通過RNAi沉默細(xì)胞內(nèi)源Bclaf1,發(fā)現(xiàn)衰老相關(guān)炎性因子IL-6、IL-8的轉(zhuǎn)錄水平受到明顯抑制。對其調(diào)控機(jī)制進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn),調(diào)控IL-6和IL-8的轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ的水平受到Bclaf1的顯著影響:RNAi沉默細(xì)胞內(nèi)源Bclaf1后,C/EBPβ在TIS中的上調(diào)受到了顯著抑制;ChIP實(shí)驗(yàn)表明Bclaf1能結(jié)合到C/EBPβ啟動子區(qū)域。這些結(jié)果表明Bclaf1對于C/EBPβ有著轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用。另外,蛋白質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Bclaf1與C/EBPβ的亮氨酸拉鏈區(qū)域能直接相互作用,后續(xù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在TIS中Bclaf1會協(xié)同C/EBPβ調(diào)控細(xì)胞因子IL-8的產(chǎn)生。最后,用結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29進(jìn)行了裸鼠載瘤實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,敲低Bclaf1對正常生長的腫瘤影響不顯著,卻嚴(yán)重降低了腫瘤對化療藥物Doxorubicin的敏感度。這些研究提示著Bclaf1的水平可能對化療藥物的治療效果會產(chǎn)生較大影響。本課題的第二部分研究集中在Bclaf1在低氧應(yīng)激中的調(diào)控及功能。發(fā)現(xiàn)Bclaf1在多種腫瘤細(xì)胞低氧處理后會發(fā)生上調(diào)。而敲低Bclaf1的細(xì)胞在低氧環(huán)境下的生長受到了顯著抑制。在用Western Blot和熒光定量PCR進(jìn)行信號通路的檢測中發(fā)現(xiàn)Bclaf1的敲低顯著抑制了 HIF1α的在低氧激活后的穩(wěn)定性及轉(zhuǎn)錄活性。綜上所述,我們的研究揭示了 Bclaf1在兩種細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)中的重要作用:在持續(xù)性DNA損傷誘導(dǎo)細(xì)胞衰老中,Bclaf1在功能上像NF-κB信號通路中的一個(gè)放大器,直接被NF-κB上調(diào),然后通過提高轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ的表達(dá)和活性,促進(jìn)受NF-κB調(diào)控的炎性因子的分泌和細(xì)胞衰老;而在低氧應(yīng)激中,Bclaf1會被轉(zhuǎn)錄因子HIF1轉(zhuǎn)錄調(diào)控,并在HIF1α的穩(wěn)定性和功能調(diào)控上起到非常重要的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：Q78

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本文編號：1625648