本文關鍵詞：Hippo信號通路中TEAD蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能研究　出處：《吉林大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： Hippo TEAD 棕櫚�；� X射線晶體衍射 小分子抑制劑

【摘要】：TEA結(jié)構(gòu)域(TEAD)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合共激活劑YAP和TAZ并且調(diào)節(jié)Hippo信號通路的轉(zhuǎn)錄輸出。TEAD蛋白質(zhì)在調(diào)控器官大小和腫瘤形成過程中起著非常重要的作用。蛋白質(zhì)的S型棕櫚�；揎棸岩粋�脂肪酸鹽—棕櫚酸鹽分子,附加到半胱氨酸殘基上,并且調(diào)控著蛋白質(zhì)的運輸,膜定位和信號傳輸活動�；诓豢赡娴淖貦磅＾D(zhuǎn)移酶(PATs)的抑制劑來構(gòu)建了可以使酶或自我棕櫚�；揎椀牡鞍踪|(zhì)的活性位點半胱氨酸烷基化的化學活性探針,2-bromopalmitate (2-BP)和cerulenin。我們合成了多加一個炔烴尾巴的2-BP和cerulenin的類似物。他們是可以用來共價標記并指示PATs依賴或自我棕櫚�；揎椀牡鞍踪|(zhì)的生物正交化學指示器。通過蛋白質(zhì)組學和生物化學的研究,我們發(fā)現(xiàn)了人類TEAD蛋白質(zhì)擁有體內(nèi)的棕櫚酰酶活性,并且在在生理條件下可以對進化上高度保守的半胱氨酸殘基進行自我棕櫚�；揎�。我們構(gòu)建、表達并純化了h TEAD2 YBD蛋白質(zhì),使蛋白質(zhì)結(jié)晶并通過X射線晶體衍射收集數(shù)據(jù)并進行數(shù)據(jù)處理。我們發(fā)現(xiàn)該晶體實際上為結(jié)合有一個棕櫚酸鹽分子的TEAD復合體,即hTEAD2-PLM復合體并解析了該復合體的結(jié)構(gòu)(PDB: 5HGU),并且發(fā)現(xiàn)棕櫚酸的脂鏈插入到一個保守的高度疏水的口袋中并結(jié)合在hTEAD2 YBD的C380位點。這為TEAD找到了一個新的配體結(jié)合位點。TEADs的棕櫚�；谡{(diào)控Hippo信號通路的轉(zhuǎn)錄復合物中起著重要的作用。本課題的研究直接把自我棕櫚酰化修飾和Hippo信號通路的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)聯(lián)系起來。我們通過藥物篩選,找到了可以與TEAD蛋白質(zhì)結(jié)合的化學分子抑制劑氟芬那酸(flufenamic acid, FA)。為了找到FA與TEAD的結(jié)合位點,我們首先使用浸泡的方法使FA分子進入到hTEAD2-PLM復合物晶體中,通過X射線晶體衍射解析了hTEAD2-FA復合體的晶體結(jié)構(gòu)(PDB:5DQ8)并發(fā)現(xiàn)FA分子定位在TEAD YBD的中心疏水口袋中且與C380位點相結(jié)合。為了充分證明該結(jié)構(gòu)中額外電子密度來源于FA分子,我們構(gòu)建了FA分子的溴帶同源物Bromofenamic aid (BFA)。將BFA分子使用同樣的方法浸泡到hTEAD2-PLM復合物晶體中,解析了hTEAD2-FA復合體的結(jié)構(gòu)(PDB:5DQE)并通過差異電子密度圖確定了額外電子密度來源于BFA分子。在晶體結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)了FA/BFA也可以與C348位點結(jié)合。而FA/BFA與hTEAD2 YBD的結(jié)合位點恰好為hTEAD2 YBD棕櫚�；揎椢稽c(C380,C348),即]FA/BFA化學分子抑制了TEAD YBD的棕櫚�；揎�。我們同時通過對TEAD2 YBD蛋白質(zhì)的棕櫚�；稽c(C348,C380)的Cto S突變檢測到TEAD與YAP親和力的減弱。也通過對位于TEAD YBD蛋白質(zhì)片段的疏水口袋開口處的丙氨酸的突變(A235,A304)而阻礙棕櫚酸鹽進入疏水口袋中,從空間位阻角度減弱了TEAD與YAP的結(jié)合。這證明了抑制TEAD的棕櫚�；揎椏梢砸种芓EAD與YAP的結(jié)合。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q51

【相似文獻】

相關期刊論文 前8條

1 史夢婕;邵松軍;李潔媚;周艷芳;黃培春;;Hippo通路與腫瘤相關性研究進展[J];中國細胞生物學學報;2014年03期

2 鮑乾坤;何金龍;朱毅;;Hippo-YAP通路在心血管系統(tǒng)中的作用[J];生理科學進展;2014年03期

3 Xudong Huang;Lai Shi;Jun Cao;Fangfei He;Renling Li;Yan Zhang;Shuang Miao;Longjin Jin;Jia Qu;Zhouhua Li;Xinhua Lin;;The Sterile 20-Like Kinase Tao Controls Tissue Homeostasis by Regulating the Hippo Pathway in Drosophila Adult Midgut[J];Journal of Genetics and Genomics;2014年08期

4 丁鑫;孟剛;童曉玲;代方銀;魯成;;WW結(jié)構(gòu)域與Hippo信號通路[J];蠶業(yè)科學;2013年06期

5 許飛;張進;馬端;;Hippo/YAP和Wnt/β-catenin通路的對話[J];遺傳;2014年02期

6 盧洪飛;萬福生;;Hippo-YAP信號通路在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用[J];生命的化學;2014年04期

7 門通;樸善花;滕春波;;Hippo信號通路轉(zhuǎn)錄效應因子TAZ/YAP對間充質(zhì)干細胞分化的調(diào)控[J];遺傳;2013年11期

8 ;[J];;年期

相關會議論文 前3條

1 Zhan Yang;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];中國生物化學與分子生物學會第十一次會員代表大會暨2014年全國學術會議論文集——專題報告五[C];2014年

2 Hongtan Wu;Luyao Wei;Suyuan Ji;Fuqin Fan;Funiu Qin;Lanfen Chen;Dawang Zhou;;MST1/2-Yap signaling pathway in organ size control and cancer development[A];生命的分子機器及其調(diào)控網(wǎng)絡——2012年全國生物化學與分子生物學學術大會摘要集[C];2012年

3 Zhan Yang;Bin Zheng;Yu Zhang;Xin-hua Zhang;Ming He;Dong Ma;Jin-kun Wen;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];第十二屆全國脂質(zhì)與脂蛋白學術會議論文匯編[C];2014年

相關重要報紙文章 前2條

1 記者 胡德榮;我學者發(fā)現(xiàn)原癌蛋白質(zhì)YAP抑制劑[N];健康報;2014年

2 記者 徐瑞哲;人造“克星”抑制胃癌[N];解放日報;2014年

相關博士學位論文 前10條

1 安健;Nedd4-like E3泛素連接酶調(diào)控Angiomotin/p130蛋白穩(wěn)定性的分子機制研究[D];復旦大學;2011年

2 劉歡;Hippo通路效應蛋白YAP調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的機制與功能研究[D];浙江大學;2015年

3 劉鵬;HBV preS2 通過miR-338-3p 調(diào)控Hippo通路效應分子TAZ促進肝細胞肝癌作用研究[D];山東大學;2015年

4 朱國華;上調(diào)miR-130b通過滅活Hippo信號通路來增強膠質(zhì)瘤干細胞的表型[D];新疆醫(yī)科大學;2015年

5 韓笑;Hippo信號通路中TEAD蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能研究[D];吉林大學;2016年

6 周鑫;Hippo-TAZ信號通路的分子調(diào)控機制[D];復旦大學;2013年

7 胡文娟;Hippo通路在常染色體顯性多囊腎病發(fā)病機制中的作用研究[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

8 張國飛;Hippo信號通路調(diào)控心肌細胞增殖機制研究[D];浙江大學;2012年

9 葉亞平;Hippo-YAP通路調(diào)控脂肪干細胞增殖和細胞譜系選擇的分子機制研究[D];華中科技大學;2014年

10 李澤;Hippo信號通路下游轉(zhuǎn)錄因子復合物YAP-TEAD的結(jié)構(gòu)與功能研究[D];復旦大學;2009年

相關碩士學位論文 前9條

1 王小燕;Alcf八個氨基酸差異選擇性剪接對核定位功能的影響及其抗體制備[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

2 梁坤;Hippo信號通路在結(jié)直腸癌中的表達及臨床意義[D];青島大學;2014年

3 魏文超;Hippo信號通路在胃粘膜癌變過程中的作用[D];青島大學;2013年

4 向晟;Hippo通路主要組分與小鼠原始卵泡池大小的時序相關性研究[D];南昌大學;2014年

5 錢瑩;家蠶Hippo信號通路主要基因的研究[D];蘇州大學;2014年

6 沈龍霞;HCMV經(jīng)Hippo-YAP信號通路對絨毛外細胞滋養(yǎng)細胞功能影響的體外研究[D];泰山醫(yī)學院;2014年

7 陳柯宏;LATS1基因去甲基化對人腎癌細胞生物學功能及其Hippo-YAP信號通路的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2014年

8 尹聰;Hippo通路與自噬共調(diào)節(jié)IUGR新生仔豬肝臟代謝的機理研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

9 張玉龍;Hippo信號通道中Lats1基因?qū)蚣∪馍L性狀遺傳調(diào)控的初步研究[D];揚州大學;2013年

，

本文編號：1326744