本文關(guān)鍵詞：乙型流感病毒Vero細胞冷適應株遺傳重配研究

  更多相關(guān)文章： Vero細胞 乙型流感病毒 減毒活疫苗 遺傳重配

【摘要】：流行性感冒病毒,簡稱流感病毒,屬正粘病毒科(Orthomyxo viridae),其為有包膜的單負鏈RNA病毒,其基因組分為8個節(jié)段。根據(jù)流感病毒核蛋白(NP)和基質(zhì)蛋白(M)抗原性的差異可劃分為甲(A)、乙(B)和丙(C)三型。乙型流行性感冒病毒雖然沒有像甲型流感病毒一樣引起過人群內(nèi)的大流行,但是能通過抗原漂移,產(chǎn)生新的病毒,每年能引起世界范圍內(nèi)的季節(jié)性流行,嚴重威脅人類的健康和生命安全。因此,季節(jié)性流感疫苗由A (H1N1)、A (H3N2)和乙型病毒共同組成生產(chǎn)毒株。目前已上市的季節(jié)性流感疫苗主要有三類：裂解疫苗、亞單位疫苗和減毒活疫苗。流感減毒活疫苗采取滴鼻方式進行接種,模擬病毒自然感染的途徑在呼吸道粘膜誘導產(chǎn)生免疫應答,免疫保護性好。目前上市的流感減毒活疫苗,都以雞胚作為基質(zhì)生產(chǎn)。使用雞胚生產(chǎn)活疫苗,由于缺乏病毒滅活的手段,存在傳播雞源病原體的風險。此外,雞胚較長的供應周期制約著疫苗生產(chǎn),尤其是突然爆發(fā)高致病性流感時,疫苗生產(chǎn)難于滿足應對流感大流行的需要。Vero細胞是WHO推薦用于生產(chǎn)人用生物制品的細胞基質(zhì),可采用發(fā)酵罐大規(guī)模培養(yǎng)病毒。相對于雞胚培養(yǎng),細胞培養(yǎng)病毒抗原變異小,更接近原始分離病毒。但Vero細胞不是培養(yǎng)流感病毒最敏感的基質(zhì),不同毒株間產(chǎn)毒量差異較大,甚或不能生長復制。目前全球尚無以Vero細胞為基質(zhì)生產(chǎn)的季節(jié)性流感病毒減毒活疫苗面市。我們經(jīng)過10多年的研究,在國際上率先成功選育出一株乙型流感病毒Vero細胞冷適應株B/Yunnan/23/2011 Vca (BVca)。本研究以BVca作為母本毒株,與WHO推薦的乙型流感病毒流行株B/Brisbane/60/2008 NYMC BX-35 (BX-35)遺傳重配,以解決Vero細胞乙型流感病毒減毒疫苗生產(chǎn)毒株制備的瓶頸技術(shù)。試驗研究中,使用Vero細胞冷適應株BVca與流行株BX-35共感染Vero細胞,在重配病毒中加入抗BVca血清中和帶有母本株表面抗原HA和NA的子代病毒,經(jīng)蝕斑純化獲得帶有BX-35的表面抗原的乙型流感病毒Vero細胞冷適應株BX-35Vca。該病毒在Vero細胞上25℃培養(yǎng),感染性滴度不低于1×107TCID50/ml,具有溫度敏感性(ts)、冷適應性(ca)和減毒(att)表型。在Vero細胞連續(xù)傳代20代,HA、NA氨基酸沒有發(fā)生變異。制備的減毒活疫苗滴鼻免疫小鼠能夠抵抗致死劑量的同系乙型流感病毒的感染。本研究首次證實BVca可作為母本毒株,采用遺傳重配技術(shù)制備Vero細胞乙型流感病毒減毒疫苗生產(chǎn)用毒株。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R373

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 梁榮根;張育琴;彭佩霞;;新分離乙型流感病毒的培養(yǎng)溫度[J];微生物學報;1966年01期

2 吳思平;乙型流感病毒免疫動物選擇[J];四川動物;1988年02期

3 李凱年;;用熒光灶測定法快速診斷甲型和乙型流感病毒[J];國外醫(yī)學.臨床生物化學與檢驗學分冊;1989年06期

4 朱汝南,錢淵,劉成貴,萬里濤,王芳,常汝虛;用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應鑒別甲型和乙型流感病毒感染[J];中華兒科雜志;2000年09期

5 龔甜;熊英;鄒明霞;方曉艷;施勇;;2007年江西省乙型流感病毒流行的分子基礎[J];實用預防醫(yī)學;2009年01期

6 楊子峰;楊春光;王玉濤;潘思華;江海明;李潤峰;關(guān)文達;;從乙型流感病毒流行株中篩選獲得鼠肺適應株的研究[J];第三軍醫(yī)大學學報;2014年05期

7 張嚴峻,盧亦愚,嚴菊英,周敏;多重逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應和半巢式多重聚合酶鏈反應快速檢出含漱液中的乙型流感病毒[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2001年01期

8 黃文萱;;甲型和乙型流感病毒在人二倍體細胞中的復制[J];國外醫(yī)學.生物制品分冊;1984年04期

9 孫雅潔;貝祝春;王京燕;;兩種化合物對流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性的抑制作用[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2009年02期

10 李敏紅;周敏;茅海燕;盧亦愚;嚴菊英;龔黎明;葛瓊;;浙江省乙型流感病毒HA_1基因分析[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2008年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 丁瑩;周衛(wèi)芳;孫慧明;丁云芳;;乙型流感病毒感染肺炎患兒的細胞免疫功能分析[A];2012年江浙滬兒科學術(shù)年會暨浙江省醫(yī)學會兒科學分會學術(shù)年會、兒內(nèi)科疾病診治新進展國家級學習班論文匯編[C];2012年

2 胡逢蛟;董紅軍;高紅;劉健毅;張姝;付燕;焦素黎;;寧波市2003年以來乙型流感病毒監(jiān)測結(jié)果與HA1序列分析[A];2005年浙江省醫(yī)學病毒學、醫(yī)學微生物與免疫學學術(shù)會議論文匯編[C];2005年

3 黃平;;流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點研討會論文集[C];2010年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 韓中龍;乙型流感病毒有何特點[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2008年

2 本報記者　 仲崇山;上半年我省發(fā)生流感六十多起[N];新華日報;2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊帆;乙型流感病毒Vero細胞冷適應株遺傳重配研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2016年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 楊帆;乙型流感病毒Vero細胞冷適應株傳代適應性及其基因研究[D];昆明醫(yī)科大學;2013年

2 劉澤;乙型流感病毒Vero細胞適應株的選育及其基因研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2009年

3 何沛思;乙型流感病毒質(zhì)子通道蛋白BM2的分子動力學模擬[D];上海交通大學;2012年

4 溫俊林;抗乙型流感病毒卵黃抗體的制備及其生物活性鑒定研究[D];廣東工業(yè)大學;2012年

5 徐紅衛(wèi);甲型和乙型流感病毒M2離子通道作為抗病毒靶點的研究[D];華東師范大學;2011年

6 徐軍;噬菌體展示候選甲型流感病毒和乙型流感病毒聯(lián)合疫苗的構(gòu)建及免疫原性研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2007年

，

本文編號：1271689