本文關(guān)鍵詞：基于定點突變技術(shù)對苦蕎麥胰蛋白酶抑制劑活性位點的研究

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【摘要】：目的:為了研究胰蛋白酶抑制劑的活性位點,揭示Ft TI結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。將Ft TI和突變體aFtTI-R65L,aFtTI-D67V和aFtTI-R65L/D67V經(jīng)IPTG誘導培養(yǎng)5h,收集菌液經(jīng)過超聲波破碎得到粗產(chǎn)物,經(jīng)過純化后的胰蛋白酶抑制劑對胰蛋白酶的摩爾抑制比分別為1∶1,1∶1.15,1∶1.3,1∶1.2;抑制常數(shù)Ki分別為1.62n M,1.69 n M,1.9 n M,1.8 n M(BAp NA作為底物)。結(jié)果:SDSPAGE分析表明突變前和突變后表達產(chǎn)物胰蛋白酶抑制劑的大小一致,均為9.5 k Da。對突變體aFtTI-R65L,aFtTI-D67V和aFtTI-R65L/D67V抑制反應溫度研究表明,其最適反應溫度均為40℃。在10~80℃保溫30 min后,突變體對胰蛋白酶的抑制活性仍保留80%以上;在90℃保溫30min,突變體的抑制活性開始顯著下降,只保留其39%。具有較高的耐熱性。將aFtTI在pH 3.0~10.0的不同緩沖溶液中放置30 min后,其抑制活性可保留90%左右,在pH 2.0條件下,aFtTI抑制活性喪失約31%;在pH 11.0條件下,aFtTI抑制活性喪失約43%。結(jié)論:對苦蕎麥蛋白酶抑制劑Ft TI的定點突變并不會改變它是一種偏堿性的胰蛋白酶抑制劑的性質(zhì),突變前后均保持了耐堿性的特點。
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學生命科學學院;武漢生物工程學院生物科學與技術(shù)學院;
【關(guān)鍵詞】： 苦蕎麥 胰蛋白酶抑制劑 定點突變 表達 抑制活性
【基金】：四川省科技廳國際合作項目(2010hh0040)資助項目
【分類號】：Q946
【正文快照】： 目前苦蕎在我國西南云貴川紅土高原和北方黃土高原等一些高寒、邊遠、干旱的山區(qū)和少數(shù)民族聚居地廣泛種植,是當?shù)氐闹饕Z食作物和經(jīng)濟作物。四川省涼山彝族自治州擁有最大面積、最集中分布的苦蕎麥栽種區(qū)域,并且也是苦蕎麥的發(fā)源地之一[1]。胰蛋白酶抑制(Trypsin inhibitor,

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本文編號：521719