目的探討人源重組蛋白顆粒蛋白前體rhPGRN(recombinant human progranulin,rhPGRN)對軟骨細胞C28I2和巨噬細胞RAW264.7增殖、自噬和內質網應激的影響及作用機制。方法采用Ni-NTA瓊脂糖樹脂對組氨酸標簽蛋白進行特異性親和純化,通過考馬斯亮藍染色、BCA法和Western blot驗證目的蛋白的純度和濃度。將細胞隨機分為對照、rhPGRN、U0126、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)、rhPGRN+U0126、rhPGRN+3-MA、rhPGRN+bafilomycin A1(Baf-A1)、rhPGRN+4-苯基丁酸鈉(4-phenyl butyric acid,4-PBA)組,采用細胞計數法、Western blot和RT-PCR檢測rhPGRN對C28I2和RAW264.7兩種不同類型細胞增殖、自噬和內質網應激(ER stress)的影響。結果(1)在含有His標簽PGRN的穩(wěn)轉細胞株中成功提取高純度、具有生物活性的人源重組蛋白rhPGRN。(2)rhPGRN能促進C28I2和RAW264.7細胞的增殖,促進細...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1GRN的基因圖譜

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文11圖1.1GRN的基因圖譜Figure1.1GenemapofGRN.A:GenomiclocationofGRN.2.2GRN基因結構與序列人類GRN基因包含兩種不同的轉錄本（圖1.2A）（引自www.ncbi.nlm.nih.gov），mRNA....

圖1.2GRN的結構與序列

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文12圖1.2GRN的結構與序列Figure1.2StructureandsequenceofGRN.A:structureofGRN,transcriptvariantX1andtranscriptvariantX2.B:Nucleicacidseq....

圖1.3不同物種間GRN基因結構比較

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文13馬魚（D.rerio）中全長26950bp，含25個外顯子，24個內含子。通過比較上述不同物種間的基因序列，發(fā)現GRN基因尤其是外顯子序列在不同物種中是高度保守的（圖1.3）（引自www.ncbi.nlm.nih.gov），最新研究表明不同種屬間....

圖1.4PGRN的蛋白質結構圖譜和蛋白相互作用網絡

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文14顆粒中，Granulin-3被證實可抑制上皮細胞增殖并誘導上皮細胞分泌IL-8[8]；Granulin-4可以促進培養(yǎng)中上皮細胞系A431的增殖[7]；Granulin-7通過與組織蛋白酶D（CathepsinD,CTSD）相互作用來穩(wěn)定CTSD....

本文編號：3965613