目的:人類細胞核內(nèi)存在著46條致密染色質(zhì),它們在不同的基因組尺度下具有不同的染色質(zhì)折疊,這可能使基因組能夠進行有效的組裝和功能組織。目前,研究染色質(zhì)折疊的技術主要有染色質(zhì)構象捕獲(3C)技術和成像技術,但他們大多數(shù)只能用于固定細胞的研究。然而,活細胞染色質(zhì)折疊的研究對于理解染色質(zhì)時空組織與基因功能的關系至關重要。近年來,CRISPR/Cas9成像技術已經(jīng)被證明可以有效用于活細胞染色質(zhì)折疊研究,該技術可以對染色質(zhì)位點進行活細胞成像。在本課題中,我們構建了多重sgRNA-CRISPR/Cas9系統(tǒng),目的是利用該系統(tǒng)初步實現(xiàn)染色質(zhì)位點的成像,并為活細胞染色質(zhì)折疊的研究提供理論基礎。方法:本課題構建質(zhì)粒的方法有連接、重組、Golden-gate克隆,構建過程中用HiPure Gel Pure Micro Kit(D2111-03)回收凝膠DNA,用HiPure Plasmid Micro Kit C(P1001-03C)提取質(zhì)粒。采用lipo3000轉(zhuǎn)染細胞,然后利用激光共聚焦顯微鏡成像觀察,最后用ImageJ處理成像數(shù)據(jù)。結(jié)果:1.CRISPR-Cas9雙光系統(tǒng)可以實現(xiàn)重復基因組序列的成像。...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語表
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究三維染色質(zhì)結(jié)構的方法
    1.2 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
第三章 結(jié)果
    3.1 雙光系統(tǒng)可以實現(xiàn)重復基因組序列的成像
    3.2 質(zhì)粒依賴的多重sgRNA組裝系統(tǒng)
    3.3 非重復基因組序列的成像
第四章 討論
    4.1 雙光系統(tǒng)的構建及應用
    4.2 多重sgRNA組裝系統(tǒng)構建
    4.3 創(chuàng)新點、不足及需繼續(xù)深入研究的內(nèi)容
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
簡歷
致謝



本文編號：3886758