CV-A6(Coxsackievirus A6)能引起手足口病,并在近年來成為流行性手足口病的主要病原體,逐漸成為全球公共健康的威脅。CV-A6能感染人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞(RD)使其出現(xiàn)細胞病變效應(cytopathic effect,CPE),并能夠在其中增殖。但其極難以在人用疫苗細胞基質(如Vero細胞)上增殖。獲得CV-A6的人用疫苗細胞基質適應株是目前工作的難點和重點所在。本課題旨在獲得CV-A6于Vero細胞上的適應株,同時研究與CV-A6 Vero細胞嗜性和生長能力相關的位點。本課題基于實驗室在前期研究中于襄陽2000余份樣本中獲得的8株CV-A6RD細胞適應株。通過在RD細胞上連續(xù)傳代,最終于RD第16代獲得了一株可在Vero細胞上生長的CV-A6適應株CV-A6-HEV3391/XY/2017株(下簡稱3391)。對3391-R16V6(RD細胞傳至16代,Vero細胞傳至6代)進行連續(xù)三輪的空斑純化。通過對生長特性、抗原含量、病毒滴度等方面的比較,選取克隆株P49-21-21為骨架,合成cDNA,構建全長cDNA質粒,進行病毒拯救,獲得了無RD細胞背景的CV-A6疫...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
前言
技術路線
第一章 :材料及實驗方法
    1.實驗材料
    2.實驗試劑及儀器
    3.實驗試劑配置
    4.實驗方法
第二章 :CV-A6疫苗株的篩選及拯救
    1.實驗結果
    2.小結
第三章 :CV-A6細胞嗜性相關位點研究
    1.實驗結果
        1.1.細胞傳代過程中細胞嗜性研究
        1.2.獲取細胞嗜性差異株
        1.3.c712/和c1023克隆株拯救
        1.4.氨基酸差異位點的點突變
    2.小結
第四章 :CV-A6生長能力的研究
    1.實驗結果
        1.1.res712與res3391 生長能力的比較
        1.2.res712與res3391 株的同源重組
        1.3.重組株生長特性的比較
    2.小結
第五章：總結與討論
    1.總結與討論
    2.下一步工作計劃
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3865177