近年來對于再生過程的研究非常熱門。蠑螈作為再生研究的模式生物有著不可代替的優(yōu)勢。蠑螈在進化上屬于脊椎動物,再生能力卻沒有像其他脊椎動物退化嚴重,其趾可以同源到人類的手指。并且對于人類有限的指再生能力,使得蠑螈趾再生相對于附肢再生的研究更有應(yīng)用前景。然而到目前為止,對于蠑螈趾部再生研究的報道甚少。本文首次開展了墨西哥鈍口螈趾部切除再生的相關(guān)實驗,包括研究再生過程形態(tài)組織學(xué)分析及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的時空表達模式和功能等。首先開展了趾部再生形態(tài)學(xué)觀察,蠑螈的趾部再生周期為5-6周。HE染色組織學(xué)分析,將趾部再生分3個階段。創(chuàng)傷愈合期,手術(shù)創(chuàng)傷幾小時后傷口附近表皮細胞遷移形成單層傷口表皮(WE)覆蓋住傷口；芽基形成期(創(chuàng)傷后3-10天),在增厚的WE(或稱頂表皮帽,AEC)下方間質(zhì)細胞聚集,進一步形成了錐體型結(jié)構(gòu)的再生芽基；分化和形態(tài)發(fā)生期,14天時在芽基內(nèi)部出現(xiàn)分化的軟骨細胞,繼而經(jīng)過復(fù)雜的分化和形態(tài)發(fā)生過程,形成血管、骨骼等,組裝成完整的趾。其次通過原位雜交技術(shù)對再生過程中相關(guān)的MMPs家族重要基因進行時空表達模式探究。結(jié)果顯示,3個基因主要在創(chuàng)傷愈合期和芽基期以特定形式表達。MM...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1. 再生及蠑螈再生研究進展
        1.1 再生研究概況
        1.2 蠑螈與其再生簡介
        1.3 蠑螈附肢再生過程
        1.4 蠑螈再生研究價值
    2 基質(zhì)金屬蛋白酶研究進展
        2.1 研究背景
            2.1.1 分子技術(shù)背景
            2.1.2 MMPs研究趨勢
        2.2 MMPs種類及特性
        2.3 再生中的MMPs研究
        2.4 MMPs功能活動小結(jié)
    3 研究目的及意義
    4 研究路線
第二章 墨西哥鈍口螈趾部再生的形態(tài)學(xué)觀察和組織學(xué)分析
    1 研究的目的和意義
    2 實驗材料和實驗內(nèi)容
        2.1 實驗對象——墨西哥鈍口螈（mbystoma mexicanum)
        2.2 實驗藥品
        2.3 實驗儀器
        2.4 實驗流程
        2.5 實驗方法
    3 實驗結(jié)果與討論
        3.1 蠑螈趾部分的再生情況
        3.2 蠑螈再生趾頭的HE染色結(jié)果
        3.3 討論
    4 總結(jié)
第三章 蠑螈趾部再生相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶基因MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9鑒定與時空表達模式研究
    1 前言
    2 實驗材料及用品
        2.1 實驗對象——墨西哥鈍口螈(Ambystoma mexicanum)
        2.2 主要化學(xué)試劑及儀器設(shè)備
        2.3 主要儀器設(shè)備
    3.實驗方法
        3.1 實驗技術(shù)路線
        3.2 引物的設(shè)計
        3.3 基因MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9片段的克隆
        3.4 原位雜交
            3.4.1 實驗所用試劑及配制方法
            3.4.2 探針合成
            3.4.3 組織原位雜交步驟
        3.5 Real-Time qPCR
    4 結(jié)果
        4.1 基因MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9片段克隆
            4.1.1 基因片段克隆模板的制備
            4.1.2 基因編碼區(qū)片段的PCR擴增
            4.1.3 基因PCR產(chǎn)物的回收、純化
            4.1.4 原核重組子構(gòu)建
            4.1.5 MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9的克隆測序結(jié)果
        4.2 MMPs在趾部再生過程中的表達模式
            4.2.1 RNA探針的合成
            4.2.2 原位雜交
        4.3 MMPs在趾部再生不同時期相對表達量
    5.討論與小結(jié)
    6.總結(jié)
第四章 MMPs酶活性鑒定
    1 試劑
    2 酶譜SDS-PAGE
    3 結(jié)果與討論
    4 小結(jié)
第五章 總結(jié)
參考文獻
附錄
致謝
個人簡歷
發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3841935