隨著基因工程和細(xì)胞工程的發(fā)展,利用高密度動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)的重組抗體藥物展示出良好的治療效果和市場(chǎng)效益,市場(chǎng)需求日益增加。由于動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)周期長(zhǎng),無(wú)菌要求高以及藥物研發(fā)的周期要求越來(lái)越短等因素影響,促使了一次性產(chǎn)品的快速發(fā)展。本文針對(duì)動(dòng)物細(xì)胞抗體生產(chǎn)上游培養(yǎng)與收獲環(huán)節(jié),對(duì)一次性生物反應(yīng)器和一次性單級(jí)澄清過(guò)濾系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)試與評(píng)估。通過(guò)對(duì)兩種一次性生物反應(yīng)器（一次性攪拌罐式生物反應(yīng)器和WAVE波浪式生物反應(yīng)器）與傳統(tǒng)生物反應(yīng)器的對(duì)比結(jié)果顯示,一次性攪拌罐式生物反應(yīng)器與傳統(tǒng)生物反應(yīng)器由于結(jié)構(gòu)及工作原理相似,生產(chǎn)中無(wú)論從細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、代謝產(chǎn)物分析、抗體表達(dá)水平及最終產(chǎn)品質(zhì)量都可以較容易的達(dá)到很好的一致性。而WAVE波浪式生物反應(yīng)器與其他兩種攪拌式生物反應(yīng)器工作原理上有所不同,所以抗體表達(dá)量和細(xì)胞生長(zhǎng)相對(duì)差一些。在細(xì)胞培養(yǎng)初期,三種生物反應(yīng)器各種檢測(cè)結(jié)果可以達(dá)到一致;但到了中后期,WAVE波浪式生物反應(yīng)器,由于代謝副產(chǎn)物濃度過(guò)高,抑制了細(xì)胞的生長(zhǎng),從而影響了產(chǎn)量,但最終產(chǎn)品的質(zhì)量未受影響,在此次比較測(cè)試中未能達(dá)到預(yù)期的結(jié)果,今后在培養(yǎng)條件控制上仍需要進(jìn)一步優(yōu)化。在對(duì)一次性單級(jí)過(guò)濾澄清系統(tǒng)的優(yōu)化中,使用... 

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 研究的目的和意義
    1.2 研究背景
        1.2.1 重組抗體生產(chǎn)的研究背景
            1.2.1.1 重組抗體的簡(jiǎn)介
            1.2.1.2 重組抗體的生產(chǎn)途徑
        1.2.2 一次性生物反應(yīng)器的研究背景
            1.2.2.1 一次性生物反應(yīng)器的種類和選擇
            1.2.2.2 一次性生物反應(yīng)器的應(yīng)用范圍
            1.2.2.3 一次性生物反應(yīng)器的優(yōu)點(diǎn)
        1.2.3 澄清過(guò)濾系統(tǒng)的研究背景
            1.2.3.1 過(guò)濾的含義
            1.2.3.2 過(guò)濾的機(jī)理
            1.2.3.3 影響過(guò)濾的因素
            1.2.3.4 制藥使用的過(guò)濾器分類與特性
            1.2.3.5 過(guò)濾器的選擇原則
            1.2.3.6 過(guò)濾系統(tǒng)的常規(guī)配置
            1.2.3.7 抗體生產(chǎn)中的細(xì)胞培養(yǎng)液澄清工藝
    1.3 研究思路及內(nèi)容
        1.3.1 研究思路
        1.3.2 研究?jī)?nèi)容
第2章 一次性生物反應(yīng)器在重組抗體生產(chǎn)中的應(yīng)用
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)過(guò)程
            2.2.1.1 培養(yǎng)基的制備
            2.2.1.2 種子的制備
            2.2.1.3 接種前各生物反應(yīng)器的準(zhǔn)備工作
            2.2.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.1.5 細(xì)胞收獲
            2.2.1.6 抗體的純化
        2.2.2 樣品處理及分析方法
            2.2.2.1 細(xì)胞計(jì)數(shù)方法
            2.2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及代謝產(chǎn)物的測(cè)定方法
            2.2.2.3 SDS-PAGE蛋白電泳方法
            2.2.2.4 等電聚焦電泳（IEF）方法
            2.2.2.5 Affinity-HPLC檢測(cè)方法
            2.2.2.6 SEC-HPLC檢測(cè)方法
            2.2.2.7 LC-MS檢測(cè)方法
            2.2.2.8 Fortebio檢測(cè)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 不同反應(yīng)器中細(xì)胞生長(zhǎng)的比較
        2.3.2 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的檢測(cè)和比較
        2.3.3 抗體表達(dá)水平的測(cè)定
        2.3.4 抗體質(zhì)量的分析比較
            2.3.4.1 SDS-Page電泳分析
            2.3.4.2 LC-MS檢測(cè)
            2.3.4.3 等電聚焦電泳分析
            2.3.4.4 多聚體檢測(cè)
            2.3.4.5 結(jié)合活性檢測(cè)
    2.4 結(jié)果分析與討論
第3章 一次性澄清過(guò)濾系統(tǒng)在重組抗體生產(chǎn)中的應(yīng)用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法與過(guò)程
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)分組及樣品預(yù)處理
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 新濾器過(guò)濾結(jié)果
            3.3.1.1 料液特性及工藝需求
            3.3.1.2 料液未預(yù)處理過(guò)濾結(jié)果
            3.3.1.3 料液預(yù)處理過(guò)濾結(jié)果
        3.3.2 新濾器與現(xiàn)有配置濾器對(duì)比結(jié)果
            3.3.2.1 澄清過(guò)濾效果與配置對(duì)比結(jié)果
            3.3.2.2 抗體收率的對(duì)比結(jié)果
            3.3.2.3 最終產(chǎn)物質(zhì)量對(duì)比結(jié)果
    3.4 結(jié)果分析與討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3725986