中國鹵蟲（Artemia sinica）是一種廣泛生活在高鹽水體的小型甲殼動物,具有極強抗逆能力,在遇到不利環(huán)境時,能進入滯育階段,形成特殊的滯育卵而暫時停滯發(fā)育,當環(huán)境適宜時能解除滯育重新發(fā)育,因其具有該項特點,已經(jīng)成為發(fā)育生物學研究的實驗生物。泛素化途徑通過E1,E2,E3一系列酶的催化降解靶蛋白,APC/C是一個代表性的E3泛素連接酶,并通過26S蛋白酶體降解特定的有絲分裂調(diào)節(jié)因子。CDC20（cell division cycle 20）是后期促進復合物APC/C的兩個輔酶因子之一,能在特定時間點結(jié)合并激活APC復合物而發(fā)揮作用,在指導細胞周期相關(guān)蛋白泛素化降解的過程中發(fā)揮重要的作用,保證正常的染色體分離。由于大部分的細胞周期相關(guān)蛋白都通過泛素化途徑進行降解,CDC20在對細胞周期的調(diào)控作用起關(guān)鍵作用。然而,目前為止對As-CDC20在中國鹵蟲滯育卵重新發(fā)育的過程中對細胞周期的調(diào)控作用尚不清楚。在本研究中,首次成功克隆得到了As-cdc20長度為1842bp的基因全長,包括1512bp的開放閱讀框,50 bp的5’UTR以及280 bp的3’-UTR,編碼氨基酸503個,蛋白分... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 鹵蟲概述
        1.1.1 鹵蟲的分類及形態(tài)特征
        1.1.2 鹵蟲的發(fā)育過程
        1.1.3 鹵蟲的經(jīng)濟價值
    1.2 CDC20的結(jié)構(gòu)特征
    1.3 CDC20的功能
        1.3.1 泛素化及APC/C復合物
        1.3.2 CDC20在細胞周期中的作用
    1.4 研究的目的及意義
2. 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 鹵蟲的孵化及培養(yǎng)
        2.1.2 主要藥品及試劑
        2.1.3 主要設(shè)備儀器
    2.2 方法
        2.2.1 鹵蟲總RNA提取
        2.2.2 反轉(zhuǎn)cDNA模板
        2.2.3 目的基因片段的擴增
        2.2.4 cDNA末端快速擴增（RACE）
        2.2.5 PCR產(chǎn)物的回收純化與克隆
        2.2.6 As-cdc20的生物信息學分析
        2.2.7 原位雜交
        2.2.8 實時熒光定量PCR
        2.2.9 As-CDC20原核表達
        2.2.10 As-CDC20大量誘導及純化
        2.2.11 免疫印跡試驗
3. 結(jié)果
    3.1 As-cdc20基因全長的克隆
        3.1.1 As-cdc20 EST片段的獲得
        3.1.2 As-cdc20基因 3’端序列的獲得
        3.1.3 As-cdc20基因 5’端序列的獲得
        3.1.4 As-cdc20基因全長序列
    3.2 As-cdc20生物信息學分析
    3.3 CDC20分子進化分析
    3.4 As-cdc20表達模式
        3.4.1 As-cdc20的表達部位
        3.4.2 As-cdc20的表達水平
    3.5 擴增As-cdc20開放閱讀框
    3.6 As-CDC20重組蛋白的純化
        3.6.1 As-CDC20重組蛋白的誘導表達
        3.6.2 檢測As-CDC20重組蛋白可溶性
    3.7 As-CDC20抗體特異性鑒定
    3.8 Western blot檢測As-CDC20蛋白的表達
        3.8.1 As-CDC20在中國鹵蟲不同發(fā)育時期的表達
        3.8.2 As-CDC20在不同鹽度刺激下的表達
        3.8.3 As-CDC20在低溫刺激下的表達
4. 討論
    4.1 中國鹵蟲As-cdc20基因的結(jié)構(gòu)特點及進化
    4.2 As-CDC20在中國鹵蟲各發(fā)育階段的表達部位
    4.3 As-CDC20在中國鹵蟲各發(fā)育時期的表達
    4.4 As-CDC20在低溫及高鹽刺激下的表達
結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3711686