哺乳動(dòng)物UHRF家族蛋白包括UHRF1與UHRF2兩個(gè)主要成員,UHRF家族蛋白在表觀遺傳學(xué)和細(xì)胞周期調(diào)控中起到重要作用,并且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有很強(qiáng)的相關(guān)性。UHRF1與UHRF2在結(jié)構(gòu)上具有很高的相似性,功能上既有相似性也有差異性,兩者并不冗余。本課題利用Cre-Loxp體系構(gòu)建了肝臟特異性過(guò)表達(dá)人源UHRF1/2小鼠模型（C57BL/6遺傳背景）,對(duì)UHRF蛋白家族開(kāi)展功能探索。肝臟特異性過(guò)表達(dá)UHRF1/2小鼠(UHRF1/2^{hep OE})能夠正常生長(zhǎng)與繁殖,基本形態(tài)正常。HE染色顯示UHRF1/2^{hep OE}小鼠肝臟大小、形態(tài)正常。質(zhì)譜結(jié)果表明UHRF2^{hep OE}小鼠肝臟的DNA甲基化與羥甲基化修飾水平與野生型小鼠無(wú)差異。采用經(jīng)典的70%肝臟切除術(shù)構(gòu)建肝臟再生模型,記錄肝臟質(zhì)量,檢測(cè)肝臟再生指示蛋白PCNA等,Western Blot與IHC的結(jié)果表明過(guò)表達(dá)UHRF2不會(huì)對(duì)肝臟再生過(guò)程造成影響。UHRF2^{hep OE}小鼠也沒(méi)有糖脂代謝的異常。研究發(fā)現(xiàn)UHRF1^{hep OE}

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【文章目錄】：
內(nèi)容摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 表觀遺傳學(xué)簡(jiǎn)介
    1.2 UHRF1 蛋白研究進(jìn)展
        1.2.1 UHRF1 蛋白結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.2 UHRF1 與表觀遺傳調(diào)控
        1.2.3 UHRF1 與癌癥
    1.3 UHRF2 蛋白研究進(jìn)展
        1.3.1 UHRF2 蛋白結(jié)構(gòu)與功能
        1.3.2 UHRF2 參與的生物學(xué)調(diào)控
    1.4 基因編輯小鼠
    1.5 肝臟相關(guān)研究概況
        1.5.1 肝臟再生的基本特征
        1.5.2 肝臟代謝
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 引物
        2.1.3 抗體
    2.2 試劑與儀器
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要溶液與藥品
        2.2.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 常用溶液及其配制
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 小鼠繁殖與飼養(yǎng)
        2.4.2 稱(chēng)重
        2.4.3 小鼠肝原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        2.4.4 血糖測(cè)定
        2.4.5小鼠肝臟部分切除實(shí)驗(yàn)
        2.4.6 小鼠基因型鑒定
        2.4.7腺病毒感染實(shí)驗(yàn)
        2.4.8 免疫熒光染色
        2.4.9 ALT-AST檢測(cè)
        2.4.10 蛋白質(zhì)印記實(shí)驗(yàn)
        2.4.11 小鼠肝臟組織基因組DNA抽提
        2.4.12 組織或細(xì)胞的RNA抽提
        2.4.13 逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)
        2.4.14 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)
        2.4.15 蘇木精-伊紅（HE）染色
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 基于UHRF2^{hep OE}小鼠模型進(jìn)行功能探索
        3.1.1 UHRF1^f/f小鼠遺傳背景純化與鑒定
        3.1.2 獲得UHRF2 基因肝臟特異性過(guò)表達(dá)小鼠
        3.1.3 UHRF^{2hep OE}小鼠的生長(zhǎng)情況
        3.1.4 UHRF2 基因肝臟特異性過(guò)表達(dá)對(duì)肝臟再生無(wú)影響
        3.1.5 UHRF2 肝臟特異性過(guò)表達(dá)對(duì)肝臟基因組DNA甲基化與羥甲基無(wú)影響
    3.2 基于UHRF1hep OE小鼠模型進(jìn)行功能探索
        3.2.1 UHRF1 基因肝臟特異性過(guò)表達(dá)（UHRF1hep OE）小鼠的鑒定與生長(zhǎng)情況
        3.2.2 UHRF1 肝臟特異性過(guò)表達(dá)對(duì)肝臟代謝的影響
        3.2.3 UHRF1 肝臟特異性過(guò)表達(dá)影響肝臟糖脂代謝相關(guān)基因
第四章 討論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄 （縮略語(yǔ)）
在學(xué)期間所得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3537402