p400（基因符號Ep400）被鑒定為新型腺病毒E1A結合復合物,屬于SWR1類DNA依賴性染色質(zhì)重塑ATP酶,含有SWI2/SNF2型的ATP酶結構域、SANT結構域、HAS結構域以及富含谷氨酰胺的結構域。p400在DNA損傷、組蛋白置換、細胞周期與著床后胚胎發(fā)育等過程中發(fā)揮重要作用。然而,當前對于p400在小鼠植入前胚胎發(fā)育過程中的功能所知甚少。因此,本研究重點探索p400在小鼠植入前胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮的功能。一、檢測小鼠各階段植入前胚胎中p400的動態(tài)變化。收集小鼠合子（10h）、2-細胞（24h）、4-細胞（48h）、桑椹胚（72h）、囊胚（96h）五個時期的植入前胚胎與小鼠生發(fā)泡（germinal vesicle,GV）時期的卵母細胞,使用免疫熒光染色技術檢測p400蛋白在植入前胚胎中的表達。顯示p400在小鼠植入前胚胎各個時期均有表達,并且主要表達于細胞核中。隨著小鼠植入前胚胎的發(fā)育,p400在受精前的GV時期至受精后的2-細胞時期表達量逐漸升高,4-細胞時期表達量降低,桑椹胚至囊胚時期再次升高,并且在囊胚時期達到最高表達量。接著通過實時熒光定量PCR檢測p400的mRNA... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

p400的結構示意圖[12]

內(nèi)蒙古大學碩士學位論文8圖1.2p400介導的細胞生長阻滯與凋亡的模式圖[12]Figure1.2Patterndiagramofp400-mediatedcellgrowtharrestandapoptosis2.4p400在DNA損傷修復過程中的功能2.4.1引起DNA損傷的原因由于外界環(huán)境因素或生物體內(nèi)部因素，生物體細胞內(nèi)時刻都存在著DNA分子的損傷或改變。如果無法精確高效的更正這些DNA損傷，則會導致細胞的死亡，進一步導致基因組不穩(wěn)定，出現(xiàn)遺傳信息傳遞錯誤。DNA損傷整體可分為兩大類，一類是內(nèi)源性的DNA損傷，包含復制錯誤、DNA堿基錯配、拓撲異構酶—DNA復合物形成、自然發(fā)生的堿基脫氨基作用、無堿基位點的出現(xiàn)和氧化導致的DNA損傷；另一類是外源性物質(zhì)導致的DNA損傷，包括電離輻射（Ionizingradiation,IR）、紫外線輻射（Ultraviolet,UV）、毒素、烷化劑等物質(zhì)以及環(huán)境壓力[65]。重復序列中的鏈滑動事件會累積更多的復制錯誤，從而導致核苷酸的插入和缺失，進而可能改變閱讀框[66]。在人類基因組中發(fā)現(xiàn)了7個TOP基因，拓撲異構酶的作用也會導致DNA損傷的出現(xiàn)，如TOPI、TOPII和TOPIII，這些酶的主要作用是消除復制和轉錄過程中DNA上的超螺旋張力[67,68]。堿基脫氨基作用是人類細胞自發(fā)誘變的主要來源，DNA中的胞嘧啶（C）、腺嘌呤（A）、鳥嘌呤（G）和5-甲基胞嘧啶（5mC）失去其環(huán)外胺而分別變成尿嘧啶（U）次黃嘌呤、黃嘌呤和胸腺嘧啶（T）。這些堿基的脫氨基事件在單鏈DNA中的發(fā)生頻率要比雙鏈DNA高得多，并且在主動復制、轉錄和重組的過程中，瞬態(tài)單鏈通常會加劇這種自發(fā)的堿基脫氨基作用的發(fā)生[69,70]。當連接含氮堿基和糖磷酸骨架的N-糖基鍵，通過自發(fā)水解或被DNA糖基化酶裂解，在堿基切除修復途徑（Base-excisionrepair,BER）中生

大量缺失[96]，該修復活動被稱為替代非同源末端連接（AlternativeNHEJ,Alt-EJ）。p400通過摻入組蛋白變體H2A.Z控制Ku向DSB的募集而影響NHEJ[97]。p400參與了Alt-EJ途徑的控制，并防止了DSB處的大缺失，p400耗竭對經(jīng)典NHEJ途徑?jīng)]有任何影響，并且可以阻礙Alt-EJ的發(fā)生[98]。首先，Alt-EJ的增加被切除的抑制作用所阻止，其次p400促進Rad51蛋白的募集，導致Alt-EJ蛋白募集受到抑制，而p400對Alt-EJ途徑的抑制作用不完全是由于HR途徑的缺陷或細胞周期分布的改變[98]。由此可以提出p400針對DSB的修復模型，如圖1.3所示。圖1.3p400調(diào)控HR和NHEJ模型圖[98]p400的缺失會使DSB修復轉向NHEJ，短片段的刪除仍舊使用經(jīng)典的NHEJ途徑，一旦出現(xiàn)長片段的刪除，修復途徑轉向容易出錯的AltEJ，出現(xiàn)遺傳不穩(wěn)定。Figure1.3p400regulationofHRandNHEJmodelDeletionofp400willcauseDSBrepairtoswitchtoNHEJ.ThedeletionofshortfragmentsstillusestheclassicNHEJapproach.Oncethedeletionoflongsegmentsoccurs,therepairapproachshiftstoerror-proneAltEJandgeneticinstabilityoccurs.


本文編號：3428286