本文關鍵詞：微生物谷氨酰胺轉氨酶生產菌株的篩選和誘變，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：轉谷氨酰胺酶廣泛的運用在工業(yè)上、農業(yè)上、食品加工業(yè)上以及化妝品工業(yè)上,能催化蛋白質產生交聯作用,轉谷氨酰胺酶具有的強大的粘合作用,被譽為“21世紀超級粘合劑”。自然界中很多微生物都能發(fā)酵生產轉谷氨酰胺酶,但是這些菌株產酶能力低、底物專一性差,這限制了其在工業(yè)中的運用。本研究致力于從自然界中篩選出產轉谷氨酰酰胺酶的菌株,以此菌株作為原始菌株進行分子生物學改造,以期提高其產轉谷氨酰酰胺酶的能力。本研究的主要研究內容如下：(1)從土壤中篩選產轉谷氨酰胺酶的菌株,比較其產酶的能力大小,選擇一株產酶能力較高的菌株作為原始菌株進行誘變。對原始菌株進行染色,顯微鏡下觀察其形態(tài)結構,根據形態(tài)特征可初步斷定為放線菌。提取原始菌株的基因組,以此基因組為模板進行16SrDNA菌種鑒定,判斷原始菌株與茂源鏈霉菌的親緣關系最接近。(2)以此菌株的基因組為模板擴增轉谷氨酰胺酶編碼基因,利用易錯PCR技術對轉谷氨酰胺酶編碼基因進行隨機突變。由于野生菌產轉谷氨酰胺酶的產量低、酶活小、底物專一性差,希望通過易錯PCR對轉谷氨酰胺酶的編碼基因進行改造,以期達到提高酶活的目的。(3)將易錯PCR的獲得的片段和未誘變的轉谷氨酰胺酶編碼基因利用分子生物學手段導入大腸桿菌進行過表達。茂源鏈霉菌發(fā)酵產酶的周期長,培養(yǎng)基復雜,而大腸桿菌具有易培養(yǎng),生長快,遺傳背景清楚等優(yōu)點,將轉谷氨酰胺酶基因導入大腸桿菌中進行過表達,可以達到降低生產成本、縮短發(fā)酵周期的目的。(4)將構建好的重組菌株進行發(fā)酵生產轉谷氨酰胺酶,溫度、轉速、時間等發(fā)酵條件會影響微生物產轉谷氨酰胺酶的能力,因此利用單因素法對大腸桿菌產酶的培養(yǎng)條件進行優(yōu)化,尋找最優(yōu)的生產條件,為探索大腸桿菌產轉谷氨酰胺酶的發(fā)酵生產打下基礎。
【關鍵詞】：轉谷氨酰胺酶 篩菌 菌株鑒定 易錯PCR 過表達 發(fā)酵條件優(yōu)化
【學位授予單位】：福建師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：Q939.9
【目錄】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-4
• 中文文摘4-9
• 緒論9-25
• 第一節(jié) 谷氨酰胺轉氨酶的簡述9-15
• 1.1 谷氨酰胺轉氨酶的來源9-11
• 1.2 谷氨酰胺轉氨酶的結構11
• 1.3 谷氨酰胺轉氨酶的反應機理11-13
• 1.4 谷氨酰胺轉氨酶的酶活檢測方法13-15
• 第二節(jié) 谷氨酰胺轉氨酶的研究進展15-17
• 2.1 動植物中提取谷氨酰胺轉氨酶15
• 2.2 微生物發(fā)酵生產谷氨酰胺轉氨酶15-16
• 2.3 分子生物學手段改造谷氨酰胺轉氨酶生產菌株16-17
• 第三節(jié) 谷氨酰胺轉氨酶的應用17-20
• 3.1 谷氨酰胺轉氨酶在肉制品中的應用17-19
• 3.2 谷氨酰胺轉氨酶在水產品中的應用19
• 3.3 谷氨酰胺轉氨酶在乳制品中的應用19
• 3.4 谷氨酰胺轉氨酶在烘焙制品中的應用19-20
• 第四節(jié) 工業(yè)微生物育種技術20-22
• 4.1 自然選育20-21
• 4.2 誘變育種21
• 4.3 基因工程21-22
• 第五節(jié) 本課題的研究目的及意義22-25
• 5.1 立題背景及意義22-23
• 5.2 本課題的研究內容23-25
• 第一章 谷氨酰胺轉氨酶生產菌株的篩選25-37
• 1.1 實驗材料26-27
• 1.2 實驗方法27-28
• 1.3 結果與討論28-35
• 1.4 本章小結35-37
• 第二章 谷氨酰胺轉氨酶生產菌株的菌種鑒定37-49
• 2.1 實驗材料38-39
• 2.2 實驗方法39-42
• 2.3 結果與討論42-48
• 2.4 本章小結48-49
• 第三章 易錯PCR法誘變谷氨酰胺轉氨酶編碼基因49-59
• 3.1 實驗材料50
• 3.2 實驗方法50-52
• 3.3 結果與討論52-56
• 3.4 本章小結56-59
• 第四章 谷氨酰胺轉氨酶基因的原核表達59-71
• 4.1 材料與方法60-62
• 4.2 實驗方法62-64
• 4.3 結果與討論64-69
• 4.4 本章小結69-71
• 第五章 產谷氨酰胺轉氨酶菌株發(fā)酵條件優(yōu)化71-83
• 5.1 材料與方法71-72
• 5.2 實驗方法72-74
• 5.3 結果與討論74-81
• 5.4 本章小結81-83
• 結論83-85
• 附錄 茂源鏈霉菌測序結果85-87
• 參考文獻87-95
• 攻讀學位期間承擔的科研任務與主要成果95-97
• 致謝97-99
• 個人簡歷99-101

【相似文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 丘振宇;潘力;許喜林;;轉谷氨酰胺酶生產菌株的誘變選育方案[J];現代食品科技;2006年03期

2 廖祥儒，朱新產，，趙軍;植物轉谷氨酰胺酶[J];生命的化學(中國生物化學會通訊);1996年05期

3 祖海珍,陸兆新,陳義華;轉谷氨酰胺酶產生菌的篩選和鑒定[J];淮海工學院學報(自然科學版);2001年02期

4 錢鐳;任德財;韓春然;張娜;劉穎;馬永強;;聚丙烯膜固定化轉谷氨酰胺酶的條件優(yōu)化[J];食品與生物技術學報;2014年01期

5 周楠迪,田亞平,華子安,張雅芬,堵國成,陳堅;微生物轉谷氨酰胺酶的純化方法和酶學性質研究[J];工業(yè)微生物;2004年03期

6 王璋,王灼維,莫湘筠;微生物轉谷氨酰胺酶的生產菌種誘變和發(fā)酵生產分析[J];生物加工過程;2003年01期

7 劉曉秋,錢世鈞;醫(yī)學研究中的轉谷氨酰胺酶[J];中國生物工程雜志;2003年11期

8 王坤;楊慧林;王斌;潘力;;轉谷氨酰胺酶酶原在大腸桿菌中的重組優(yōu)化表達[J];食品工業(yè)科技;2012年07期

9 丁克毅;劉軍;Eleanor M.Brown;Maryann M.Taylor;;轉谷氨酰胺酶(mTG)改性明膠的物理性質研究[J];食品與生物技術學報;2006年02期

10 丁克毅;;轉谷氨酰胺酶改性明膠高強度薄膜的制備[J];食品與生物技術學報;2007年01期

中國重要會議論文全文數據庫 前2條

1 任江紅;秦立虎;;轉谷氨酰胺酶及其在乳品加工業(yè)中的應用[A];首屆中國奶業(yè)大會論文集(下冊)[C];2010年

2 韓春然;李可;王強;楊楠;馬永強;;利用微生物轉谷氨酰胺酶回收大豆乳清廢水[A];2010年中國農業(yè)工程學會農產品加工及貯藏工程分會學術年會暨華南地區(qū)農產品加工產學研研討會論文摘要集[C];2010年

中國碩士學位論文全文數據庫 前10條

1 蘇小玫;微生物谷氨酰胺轉氨酶生產菌株的篩選和誘變[D];福建師范大學;2015年

2 朱佳蕾;轉谷氨酰胺酶等添加劑對即食臘腸品質影響的研究[D];仲愷農業(yè)工程學院;2014年

3 王亮亮;轉谷氨酰胺酶的試制與應用[D];山東大學;2014年

4 劉心偉;轉谷氨酰胺酶在乳蛋白間的交聯機理及應用研究[D];內蒙古農業(yè)大學;2006年

5 祖海珍;轉谷氨酰胺酶對大豆分離蛋白和肌原纖維混合蛋白成膠性的影響[D];南京農業(yè)大學;2005年

6 王強;轉谷氨酰胺酶的分離純化及膜固定化的研究[D];哈爾濱商業(yè)大學;2011年

7 張華瑩;轉谷氨酰胺酶在羊毛生物改性中的應用及研究[D];東華大學;2008年

8 姜巍巍;轉谷氨酰胺酶對大豆蛋白表面疏水性及粘度的影響[D];東北農業(yè)大學;2009年

9 王坤;茂源鏈霉菌轉谷氨酰胺酶的異源表達研究[D];華南理工大學;2013年

10 張宇;轉谷氨酰胺酶基因的克隆表達及發(fā)酵條件優(yōu)化[D];南京農業(yè)大學;2011年

  本文關鍵詞：微生物谷氨酰胺轉氨酶生產菌株的篩選和誘變，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：331304