艾克曼菌（Akkermansia muciniphila）是一種嚴格厭氧的革蘭氏陰性細菌。近年來,大量證據(jù)表明艾克曼菌可作為一種有益細菌,在維持人體胃腸道穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。過氧化物酶（Peroxiredoxins,Prxs）是生物體內(nèi)常見的硫醇特異性抗氧化蛋白,廣泛存在于多種生物體中,具有特異性強、分布廣、表達量高等特點。目前國內(nèi)外對動物、植物、酵母、原蟲等中Prxs結(jié)構(gòu)與功能的報道較為廣泛,關(guān)于厭氧細菌Prxs相關(guān)研究較少。根據(jù)序列比對結(jié)果推測艾克曼菌的Prx（AmPrx）為典型的2-Cys Prxs,此外,在序列上發(fā)現(xiàn)AmPrx比已知結(jié)構(gòu)的典型2-Cys Prxs在α4螺旋和β6折疊片之間多出一段插入。本課題為探究AmPrx的結(jié)構(gòu)與功能,通過大腸桿菌異源表達獲得AmPrx重組蛋白,使用坐滴法進行晶體生長。利用X射線衍射技術(shù)解析了AmPrx晶體結(jié)構(gòu),晶體的衍射分辨率為2.6?。同時在體外測定了AmPrx的過氧化物酶活性,并研究了AmPrx與艾克曼菌硫氧還蛋白（Akkermansia muciniphila thioredoxin,AmTrx）之間的相互作用。結(jié)構(gòu)解析結(jié)果表明AmPr... 

【文章來源】：安徽大學安徽省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

過氧化物酶(Prx)的反應機理（RheeSGetal.2017）

安徽大學碩士學位論文7圖1.2AmPrx與其他典型2-CysPrxs的序列比對Figure1.2SequencealignmentofAmPrxagainstothertypical2-CysPrxsfromdifferentorganisms.AmPrx的二級結(jié)構(gòu)顯示在序列的上方。CP和CR用黑色箭頭表示。比對的序列分別為:AkkermansiaglycaniphilaPrx,Haloferulasp.BvORR071Prx,RubritaleamarinaPrx,BacteroidesgraminisolvensPrx,MarinifilumflexuosumPrx,HomosapiensPrx1,HomosapiensPrx2,HomosapiensPrx3,HomosapiensPrx4,MusMusculusPrx4,ArabidopsisthalianaPrxA,andHookwormAncylostomaPrx1.

第二章實驗材料與方法20○8測各孔在560nm處的吸光值，○6-○8步驟重復3次，計算同樣編號三孔的平均值�！�9繪制標準曲線（如圖2.1）。圖2.1H2O2濃度標準曲線Figure2.1StandardcurveofH2O2concentration2.2.8AmPrx過氧化物酶活性測定根據(jù)酶活測定的原理，本實驗用H2O2定量分析試劑盒測定AmPrx蛋白酶活性。實驗開始前，先配置反應體系所用的緩沖液（20mMTris-HCl,pH7.5,300mMNaCl,5%glycerol），再向反應體系中加入0.5mMDTT、6μMAmTrx蛋白,以及4μMAmPrx及其突變體蛋白(AmPrxC49S,AmPrxS80E,AmPrx△120-132)。然后25℃恒溫孵育10min后，按照試劑盒說明書配制檢測液，配好后，按照每孔200μl的體積加入96孔酶標板，孵育10min后向體系中加入90μMH2O2，然后分別在反應1、2、3、4、5min時取10μl的反應液加入96孔板中的H2O2定量分析試劑盒檢測液中（此過程重復3次），混勻20min后立即放入酶標儀選擇波長560nm并讀數(shù)，根據(jù)讀數(shù)計算H2O2的消耗量。每個實驗組重復3次，并計算標準差。2.2.9圓二色光譜實驗圓二色光譜（CD譜）可以檢測溶液狀態(tài)下蛋白的二級結(jié)構(gòu)，是目前測定蛋白質(zhì)二

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Gut microbiota role in irritable bowel syndrome: New therapeutic strategies[J]. Eleonora Distrutti,Lorenzo Monaldi,Patrizia Ricci,Stefano Fiorucci.  World Journal of Gastroenterology. 2016(07)



本文編號：3268314