發(fā)布時(shí)間：2021-06-17 15:00

　　目的:本研究的目的是探索是否存在新的NRXN基因的轉(zhuǎn)錄本,分析NRXN基因相關(guān)的啟動(dòng)子功能區(qū)域,以探究突觸粘附分子編碼基因NRXN的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。方法:通過(guò)對(duì)NRXN3基因7個(gè)轉(zhuǎn)錄本的序列和蛋白結(jié)構(gòu)域比對(duì)分析,以及PCR擴(kuò)增特異的外顯子區(qū)域確定NRXN3基因新型轉(zhuǎn)錄本。通過(guò)構(gòu)建熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染細(xì)胞并檢測(cè)熒光素酶活性確定NRXN3δ和NRXN2α啟動(dòng)子活性區(qū)域,在構(gòu)建的啟動(dòng)子報(bào)告基因質(zhì)粒的基礎(chǔ)上對(duì)DNA序列進(jìn)行進(jìn)一步刪切和點(diǎn)突變鑒定功能區(qū)域和順式作用元件。通過(guò)對(duì)核心啟動(dòng)子區(qū)域進(jìn)行序列分析和查詢(xún)dbTSS數(shù)據(jù)庫(kù)分析典型和非典型的核心啟動(dòng)子元件。結(jié)果:對(duì)NRXN3基因的分析,我們發(fā)現(xiàn)了從未報(bào)道過(guò)的人類(lèi)NRXN3基因的第三種獨(dú)特的轉(zhuǎn)錄本,命名為δ-NRXN3。我們進(jìn)一步鑒定了δ-NRXN3的最強(qiáng)啟動(dòng)子活性區(qū)域,最小啟動(dòng)子區(qū)域和具有基礎(chǔ)活性的核心啟動(dòng)子區(qū)域以及三個(gè)NRXN3δ基因正向調(diào)控功能區(qū)域和四個(gè)負(fù)向調(diào)控功能區(qū)域。此外,我們?cè)贜RXN3δ基因的核心啟動(dòng)子區(qū)域中鑒定了兩個(gè)非典型的核心啟動(dòng)子元件和典型的Inr基序。對(duì)NRXN2α基因的啟動(dòng)子分析,我們確定了NRXN2α基因的啟動(dòng)子活性區(qū)域和... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

SignalP5.0neurexins蛋白信號(hào)肽預(yù)測(cè)結(jié)果

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文67并非都是常規(guī)的“一對(duì)一”模式。根據(jù)是否參與突觸以外功能可以將突觸細(xì)胞粘附分子分成以突觸功能為主的粘附分子（例如neurexins和neuroligins）和非突觸功能為主粘附分子（例如dystroglycan，teneurins或LAR型PTPR）。部分突觸細(xì)胞粘附分子也可能參與大腦的發(fā)育，特別是神經(jīng)元的遷移（例如MDGA和FLRT）[21]。圖1跨突觸分子相互作用網(wǎng)絡(luò)示意圖Figure1.Schematicdiagrammolecularnetworkoftrans-synapticinteractionNeurexins基因和蛋白結(jié)構(gòu)Neurexins是特異性表達(dá)于神經(jīng)元表面的跨膜蛋白，在哺乳動(dòng)物中由3個(gè)非連鎖的基因組成，分別為NRXN1、NRXN2、NRXN3，其中NRXN1和NRXN3是已知人類(lèi)基因中分子量最大的基因，在人類(lèi)基因組中的大小分別為1.1Mb和1.7Mb，覆蓋整個(gè)人類(lèi)基因組近0.1%，而NRXN2相對(duì)較小，僅有110kb。NRXN1和NRXN2

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文69圖2Neurexins家族基因結(jié)構(gòu)示意圖Figure2.SchematicdiagramofthegenestructureoftheNeurexins圖3Neurexins家族蛋白結(jié)構(gòu)域以及剪切位點(diǎn)示意圖Figure3.SchematicdiagramofneurexinsproteindomainsandalternativesplicingsitesNeurexins的可變剪切與分子多樣性Neurexins經(jīng)6個(gè)經(jīng)典的剪切位點(diǎn)選擇性剪切生成數(shù)千種亞型，其中α-NRXN包含剪切位點(diǎn)SS#1-SS#6，β-NRXN包含剪切點(diǎn)SS#4和SS#5，而γ-NRXN1包含剪切點(diǎn)SS#5[26,27]（圖3）。不同的亞型在大腦的不同部位表達(dá)不同，對(duì)于確定的神經(jīng)元和確定的剪切位點(diǎn)，neurexin的可變剪切通常是連續(xù)進(jìn)行的，并非為“全或無(wú)”的模式。不同類(lèi)型的神經(jīng)元對(duì)于確定的剪切位點(diǎn)表達(dá)的mRNA不同，可能包括或不包括相應(yīng)的剪切位點(diǎn)[28]。Neurexins家族三個(gè)基因NRXN1，NRXN2和NRXN3在大

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]48孔板熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)邊緣效應(yīng)[J]. 廖丹,徐云飛,孟莎莎,周衛(wèi)輝.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(09)



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