植物的胚胎后發(fā)育取決于分生組織的活性,因此分生組織中細胞的命運對植物的發(fā)育和株型至關(guān)重要。轉(zhuǎn)錄抑制因子通過與其他蛋白的互作,從而對基因的表達起相應(yīng)的抑制作來調(diào)節(jié)基因的功能。目前已報道的植物轉(zhuǎn)錄因子包括擬南芥TOPLESS （TPL）,玉米RAMOSA1 ENHANCER LOCUS2（REL2）和水稻ABERRANT SPIKELET AND PANICLEI（ASP1）均屬于轉(zhuǎn)錄抑制因子TUP1家族。這類轉(zhuǎn)錄因子能調(diào)控發(fā)育及生理反應(yīng)的多個方面,如穗、枝梗和小穗等的發(fā)育,同時對葉腋分生組織的維持起重要作用。本研究以普通小麥作為研究材料,通過電子克隆及PCR克隆等方法,分離得到小麥TaASP1基因序列,并對該基因的表達模式及功能進行了初步的研究,為深入解析該基因在小麥形態(tài)發(fā)育和環(huán)境應(yīng)答等方面的作用奠定基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)果如下：1. 以水稻OsASP1基因（GenBank登錄號：AK111830）的cDNA序列為模板,Blast檢索NCBI中小麥EST數(shù)據(jù)庫,選取同源性較高的7對EST序列進行拼接,獲得包含完整開放閱讀框（ORF）的3591bp序列；并以該序列為模板設(shè)計4對相互重疊特異引... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 文獻綜述
    1.1 分生組織的發(fā)育
    1.2 Groucho(GRO)/TUP1轉(zhuǎn)錄因子
    1.3 TOPLESS亞家族
        1.3.1 擬南芥TOPLESS(TPL)
        1.3.2 玉米RAMOSA1 ENHANCER LOCUS2(REL2)
        1.3.3 水稻ABERRANT SPIKELETAND PANICLE1(ASP1)
    1.4 立題依據(jù)
2 材料和方法
    2.1 實驗材料和試劑
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株
        2.1.3 質(zhì)粒載體
        2.1.4 試劑
        2.1.5 培養(yǎng)基
        2.1.6 電泳緩沖液
        2.1.7 PCR引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小麥組織的收集
        2.2.2 小麥總RNA的提取
        2.2.3 小麥cDNA第一鏈的合成
        2.2.4 基因組DNA的提取
        2.2.5 小麥TaASP1的全長cDNA的擴增
        2.2.6 PCR產(chǎn)物末端加“A”
        2.2.7 PCR產(chǎn)物的回收純化
        2.2.8 膠回收產(chǎn)物與TA克隆載體的連接反應(yīng)
        2.2.9 與大腸桿菌的熱激轉(zhuǎn)化
        2.2.10 陽性檢測及測序
        2.2.11 小麥TaASP1基因組DNA的擴增
        2.2.12 生物信息學(xué)分析
        2.2.13 染色體定位分析
        2.2.14 熒光定量
        2.2.15 亞細胞定位
        2.2.16 TaASP1啟動子功能的驗證
3 結(jié)果與分析
    3.1 小麥TaASP1的全長cDNA的PCR擴增
    3.2 基因組DNA的克隆和序列分析
    3.3 基因的序列分析
    3.4 小麥TaASP1基因的生物信息學(xué)分析
        3.4.1 小麥TaASP1蛋白的理化性質(zhì)分析
        3.4.2 小麥TaASP1蛋白的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.4.3 小麥TaASP1基因編碼蛋白的疏親水性分析
        3.4.4 小麥TaASP1基因的同源性分析
    3.5 小麥TaASP1基因的染色體定位分析
    3.6 小麥TaASP1基因的熒光定量PCR分析
    3.7 小麥TaASP1基因的亞細胞定位
        3.7.1 載體構(gòu)建的過程
        3.7.2 基因槍轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細胞
    3.8 小麥TaASP1啟動子功能的驗證
        3.8.1 載體構(gòu)建的過程
        3.8.2 轉(zhuǎn)基因煙草的鑒定
4 討論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3190233