雞白痢沙門菌（Salmonella pullorum）是一種常見(jiàn)的禽類病原菌,可引起雛雞關(guān)節(jié)炎、腹瀉和食欲不振等一些急性系統(tǒng)性疾病,可以通過(guò)雞胚垂直傳播,還會(huì)通過(guò)糞便和飲用水經(jīng)消化道和呼吸道水平傳播。感染雞白痢沙門菌會(huì)導(dǎo)致雞的生產(chǎn)性能下降,明顯降低種蛋孵化率,或引起雞群的大規(guī)模發(fā)病和死亡,嚴(yán)重影響畜禽健康,造成重大經(jīng)濟(jì)損失。沙門菌是我國(guó)農(nóng)業(yè)部要求重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的14種動(dòng)物疫病病原菌之一,所有種畜禽場(chǎng)必須凈化。而且在食品安全方面,所有涉及的食品現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中,均不得檢出沙門菌,這也使沙門菌的凈化不僅僅涉及畜禽養(yǎng)殖行業(yè),更關(guān)乎食品安全和公共衛(wèi)生安全。近年來(lái)由于抗生素的濫用,雞白痢沙門菌已經(jīng)對(duì)多種抗生素產(chǎn)生耐藥性,日益成為影響家禽養(yǎng)殖業(yè)和公共衛(wèi)生安全的重要病原菌,嚴(yán)重制約養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展,影響公共衛(wèi)生安全。噬菌體作為一類能特異性識(shí)別裂解病原微生物的一種病毒,可利用其宿主特異性對(duì)特定微生物進(jìn)行檢測(cè)。尾絲蛋白是噬菌體特異性識(shí)別宿主的物質(zhì)基礎(chǔ),篩選表達(dá)出噬菌體的尾絲蛋白在特定微生物檢測(cè)凈化等方面具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)對(duì)噬菌體YSP2進(jìn)行純化濃縮后,使用蛋白質(zhì)多肽分子鑒定技術(shù)對(duì)其進(jìn)行全蛋白質(zhì)譜分析,結(jié)果得到52個(gè)蛋... 

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密度梯度離心后的噬菌體YSP2Fig.1-1BacteriophageYSP2afterdensitygradientcentrifugation

第二篇研究?jī)?nèi)容第一章噬菌體YSP2的總蛋白質(zhì)譜分析及尾絲蛋白分析19菌屬的噬菌體具有極大相似性；而Chaperonin只與氨基酸數(shù)據(jù)庫(kù)中的噬纖維菌屬噬菌體具有相似性；Galactose-1-phosphateuridylyltransferase的確定則來(lái)自數(shù)據(jù)庫(kù)中的乳酸菌噬菌體。圖1-2噬菌體YSP2蛋白質(zhì)譜基峰Fig.1-2BasepeakofphageYSP2proteinspectrum

第二篇研究?jī)?nèi)容第一章噬菌體YSP2的總蛋白質(zhì)譜分析及尾絲蛋白分析201.3.3尾絲蛋白氨基酸比對(duì)分析實(shí)驗(yàn)前期根據(jù)噬菌體全基因測(cè)序結(jié)果，擴(kuò)增ORF35、ORF44兩段假定尾絲蛋白基因，構(gòu)建原核表達(dá)載體，并驗(yàn)證成功后構(gòu)建重組表達(dá)菌株，ORF35、ORF44理論擴(kuò)增片段大小分別為2409bp、3777bp，電泳結(jié)果如圖1-3所示，條帶大小符合預(yù)期；之后經(jīng)過(guò)連接轉(zhuǎn)化后用BamHI、XhoⅠ酶切鑒定、PCR擴(kuò)增驗(yàn)證，酶切理論片段大小約為5329bp和2409bp、3777bp，酶切驗(yàn)證電泳結(jié)果如圖1-4所示，PCR擴(kuò)增驗(yàn)證結(jié)果如圖1-5所示，條帶大小符合預(yù)期。但是在探究蛋白表達(dá)條件的實(shí)驗(yàn)中一直沒(méi)能成功表達(dá)尾絲蛋白，在對(duì)基因片段進(jìn)一步分析后，對(duì)比數(shù)據(jù)庫(kù)中相應(yīng)的氨基酸的功能，選擇了長(zhǎng)度為1503bp的ORF35的截短片段35Q（圖1-6），并進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。通過(guò)比對(duì)分析可知，35q可能為噬菌體YSP2的尾絲蛋白基因序列，該尾絲蛋白含有500個(gè)氨基酸，大約為55KDa。35Q與沙門菌噬菌體phaSE-2尾絲蛋白，沙門菌噬菌體vB_SenS_PHB07尾絲蛋白和檸檬酸桿菌噬菌體CF1DK-2017尾絲蛋白的同源性分別為83.40%，61.20%和60.40%（見(jiàn)圖1-7）。圖1-3ORF35、ORF44PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.1-3ORF35,ORF44PCRamplificationproducts1：ORF35PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；2：ORF44PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；M：DL5000DNAmarker

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]一株山羊源腸炎沙門氏菌對(duì)小鼠的致病性研究[J]. 譚爍,馮帆,陳極奎,湯承,岳華.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(13)
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碩士論文
[1]雞白痢沙門菌噬菌體裂解酶LySP2在畢赤酵母中的表達(dá)及其初步應(yīng)用[D]. 張楸楊.吉林大學(xué) 2018
[2]雞白痢沙門菌噬菌體的分離鑒定及其初步應(yīng)用[D]. 袁玉玉.吉林大學(xué) 2016



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