作為細(xì)胞核激素受體的核心轉(zhuǎn)錄共激活因子,p160家族的三個同源成員蛋白（SRC1,SRC2和SRC3）中的SRC1（NCOA1）在1995被發(fā)現(xiàn),之后SRC2（也稱TIF2,GRIP1或NCOA2）和SRC3（也稱P/CIP,RAC3,AIB1,ACTR,TRAM1或NCOA3）相繼被發(fā)現(xiàn)。大量的文獻(xiàn)報道SRCs家族成員不僅是細(xì)胞核激素受體的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄共激活因子,還廣泛參與其它轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,此外SRC3還在癌癥中扮演重要的作用。SRC3以及SRC1在1997年被報道具有乙�；揎椕富钚�,但之后關(guān)于這兩者的酶活真實性科學(xué)界一直存在爭議,且后續(xù)沒有SRC3蛋白本身以及關(guān)于其酶活的結(jié)構(gòu)信息報道。我們想通過解析SRC3蛋白結(jié)構(gòu)為SRC3的相關(guān)研究提供結(jié)構(gòu)依據(jù)并為其是否具有乙酰化酶活提供結(jié)構(gòu)信息。另外,解析SRC3的結(jié)構(gòu)可以為開發(fā)針對SRC3的小分子抑制劑,用于今后SRC3相關(guān)癌癥的臨床治療提供幫助。為了獲得結(jié)構(gòu)研究所需的大量SRC3蛋白,我們首先選擇使用最簡單、快速且成本較低的大腸桿菌系統(tǒng)進行不同的SRC3截短體蛋白的表達(dá)和分離純化,但發(fā)現(xiàn)SRC3在大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)很低,即便我們進行了不同... 

【文章來源】：華東師范大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Waddington的古典表觀遺傳景觀[4]1957年ConradWaddington提出了表觀遺傳學(xué)概念，以代表細(xì)胞決策的過程

21.2組蛋白修飾1.2.1組蛋白修飾類型與功能組蛋白是染色體的重要組成部分，染色體由DNA、組蛋白以及非組蛋白幾部分構(gòu)成，染色體的基本結(jié)構(gòu)單位是核小體，核小體是2分子H2A、H2B、H3以及H4組成組蛋白八聚體并由147bpDNA分子纏繞形成。每分子核小體八聚體之間由鉸鏈核酸和一分子H1組蛋白連接形成染色質(zhì)，染色質(zhì)繼續(xù)折疊固縮形成染色體。染色質(zhì)結(jié)構(gòu)中組蛋白尾巴裸漏在外，其可以發(fā)生多種組蛋白修飾。近年來隨著質(zhì)譜技術(shù)的飛速發(fā)展，以芝加哥大學(xué)趙英明教授實驗室為首，先后鑒定了包括丙�；�，丁�；投辊；�，棕櫚�；樗峄刃滦偷鞍踪|(zhì)翻譯后修飾（post-translationalmodification，PTM）[5-7]。組蛋白尾巴上含有多個可以修飾的氨基酸，其中經(jīng)典的修飾發(fā)生在以精氨酸、賴氨酸為主的氨基酸上。多發(fā)生包括甲基化、ADP-核糖基化、泛素化、磷酸化、糖基化，以及其他�；揎�。大量的文獻(xiàn)報道集中在酰化修飾、甲基化以及磷酸化修飾，科學(xué)界普遍認(rèn)為這些組蛋白修飾在很大程度上決定了染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和開放狀態(tài)。近年的科研發(fā)現(xiàn)了很多修飾相關(guān)酶，這些酶負(fù)責(zé)“書寫”和“擦除”表觀遺傳標(biāo)記。下面我們將對其中部分修飾進行介紹。圖1.2.1a組蛋白H3表觀修飾的“書寫器”、“閱讀器”和“擦除器”[8]。左側(cè)標(biāo)出翻譯后修飾（PTM）的組蛋白H3尾部賴氨酸殘基。陰影塊指示為遠(yuǎn)端增強子的長度。綠色表示甲基化，藍(lán)色表示活性基因相關(guān)的組蛋白乙酰化標(biāo)記，紅色表示沉默的基因。右側(cè)列出了一些相關(guān)酶。

華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文3組蛋白甲基化修飾無疑是表觀遺傳學(xué)的一大熱土。近年來科學(xué)家在組蛋白甲基化修飾領(lǐng)域投入了大量資源，該領(lǐng)域也已發(fā)表眾多科研成果，細(xì)數(shù)組蛋白甲基化研究歷程我們會發(fā)現(xiàn)早在1960年RNA的合成即被證明受到了組蛋白中氨基的甲基化調(diào)節(jié)[9,10]，但是直到2000年，才發(fā)現(xiàn)了第一個組蛋白KMT，即人源SUV39H1（KMT1A），該工作由ThomasJenuwein和他的同事完成，并證明該酶從酵母到人具有高度保守性[11]。由于KMT1A的發(fā)現(xiàn)，后續(xù)根據(jù)SET結(jié)構(gòu)域的同源性搜索，Dillon等人先后確定了數(shù)十種KMT[12]。另外，除了含有SET結(jié)構(gòu)域的甲基轉(zhuǎn)移酶之外，還有一類組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶不含有SET結(jié)構(gòu)域即KMT4，但兩種類型甲基轉(zhuǎn)移酶具有一個共同點即是都以S-腺苷-甲硫氨酸（SAM）作為甲基供體[12-15]。甲基化修飾具體分為以下幾種類型，圖1.2.1b組蛋白甲基化普遍機制[16]。其中賴氨酸上可以發(fā)生單甲基、二甲基、三甲基化，精氨酸上可以發(fā)生單甲基化、對稱二甲基化和非對稱二甲基化，另外據(jù)報道組蛋白也可以發(fā)生單甲基化修飾[10,17-20]�，F(xiàn)今為止，研究最為廣泛的甲基化位點包括賴氨酸的H3K4、H3K9、H3K27、H3K36、H3K79以及H4K20和精氨酸的H3R2、H3R8、H3R17、H3R26、H4R3�；厥走^去，很長一段時間科學(xué)界認(rèn)為組蛋白甲基化修飾是一種不可逆的修飾，直到H3K4去甲基化酶KDM1（LSD1）的發(fā)現(xiàn)證明了組蛋白甲基化修飾為可逆的修飾類型[21]。按照該研究的思路，現(xiàn)如今已發(fā)現(xiàn)一大批甲基轉(zhuǎn)移酶和組蛋白去甲基化酶，他們分別識別不同的底物，作用在不同的甲基化位點履行著去除甲基的功能[22]。但是值得注意的是組蛋白上的甲基化標(biāo)記并不孤立存在。同一組蛋白

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SRC-3/AIB1:transcriptional coactivator in oncogenesis[J]. Sophia Y TSAI,Ming-jer TSAI.  Acta Pharmacologica Sinica. 2006(04)



本文編號：3133444