隨著水貂養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模化程度的不斷提高,疫病的流行嚴重妨礙了水貂養(yǎng)殖行業(yè)的健康發(fā)展,造成了重大的經(jīng)濟損失。水貂腸炎細小病毒（mink enteritis parvoviruses,MEV）是嚴重危害水貂的主要病原之一,發(fā)病率和死亡率較高。在生產(chǎn)實踐中,接種水貂腸炎細小病毒疫苗是防控水貂病毒性腸炎的重要措施。但近年來,疫苗免疫失敗的例子時有發(fā)生,深入了解MEV的分子演化特征對于水貂病毒性腸炎的防控具有重要意義。2015-2016年,本實驗室在我國山東省主要水貂養(yǎng)殖地區(qū)表現(xiàn)腸炎癥狀的水貂體內(nèi)分離到8株細小病毒,命名為MEV-SD1^MEV-SD8,其中MEV-SD7、MEV-SD8 VP2蛋白300位氨基酸為Val,而MEV-SD1^MEV-SD6 VP2蛋白300位氨基酸為Ala,與貓細小病毒（feline parvoviruses,FPV）VP2蛋白300位氨基酸一致。本課題以MEV-SD1、MEV-SD7為研究對象,采用HA/HI、IFA、生長曲線測定、流式細胞術(shù)等方法,對MEV-SD1、MEV-SD7的交叉免疫反應(yīng)、感染效率、增殖以及對細胞的損傷... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
1 綜述
    1.1 食肉動物細小病毒
    1.2 水貂腸炎細小病毒的病原學(xué)特性
        1.2.1 水貂腸炎細小病毒的形態(tài)特點和理化性質(zhì)
        1.2.2 水貂腸炎細小病毒的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 水貂腸炎細小病毒編碼蛋白及功能
        1.2.4 水貂腸炎細小病毒的復(fù)制機制
    1.3 水貂腸炎細小病毒的流行病學(xué)特征
        1.3.1 水貂腸炎細小病毒的致病機理
        1.3.2 水貂腸炎細小病毒的感染和傳播特性
        1.3.3 水貂腸炎細小病毒的臨床癥狀
    1.4 水貂腸炎細小病毒的流行病學(xué)
        1.4.1 水貂腸炎細小病毒的起源與進化
        1.4.2 水貂腸炎細小病毒感染的宿主特異性
    1.5 水貂腸炎細小病毒的預(yù)防與診斷
        1.5.1 水貂腸炎細小病毒的預(yù)防
        1.5.2 水貂腸炎細小病毒的診斷
    1.6 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒來源
        2.1.2 細胞、菌株和載體
        2.1.3 實驗動物
        2.1.4 引物
        2.1.5 實驗耗材與試劑
        2.1.6 實驗儀器
    2.2 方法
        2.2.1 主要試劑的配制
        2.2.2 CRFK細胞的復(fù)蘇及凍存
        2.2.3 CRFK細胞的培養(yǎng)和傳代
        2.2.4 MEV的培養(yǎng)與增殖
        2.2.5 MEV感染力測定
        2.2.6 多步生長曲線
        2.2.7 間接免疫熒光
        2.2.8 細胞凋亡檢測
        2.2.9 細胞周期檢測
        2.2.10 血凝試驗
        2.2.11 血凝抑制試驗
        2.2.12 細胞活性檢測
        2.2.13 實時熒光定量PCR
        2.2.14 小鼠抗MEV單因子血清制備
        2.2.15 MEV-SD1和MEV-SD7 感染性克隆的構(gòu)建
        2.2.16 pM-MEV-SD1和pM-MEV-SD7 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CRFK細胞及病毒拯救
        2.2.17 MEV-SD1、MEV-SD7 VP2300 位氨基酸定點突變病毒的拯救
3 結(jié)果
    3.1 MEV-SD1和MEV-SD7 的分子生物學(xué)特征比較
        3.1.1 MEV-SD1、MEV-SD7對CRFK細胞感染效率的比較
        3.1.2 MEV-SD1、MEV-SD7在CRFK細胞中復(fù)制能力的比較
        3.1.3 MEV-SD1、MEV-SD7 誘導(dǎo)細胞凋亡的比較
        3.1.4 MEV-SD1、MEV-SD7 對細胞周期阻滯作用的比較
        3.1.5 MEV-SD1、MEV-SD7 交叉中和試驗
    3.2 MEV-SD1和MEV-SD7 感染性克隆的構(gòu)建及全基因組序列分析
        3.2.1 pM-MEV-SD1和pM-MEV-SD7 重組質(zhì)粒的構(gòu)建及病毒拯救
        3.2.2 MEV-SD1和MEV-SD7 全基因組序列分析
    3.3 VP2 蛋白A300V對水貂腸炎細小病毒分子生物學(xué)特性的影響
        3.3.1 MEV-SD1、MEV-SD7 VP2300 位氨基酸定點突變病毒的拯救
        3.3.2 VP2 A300V對病毒感染效率的影響
        3.3.3 VP2 A300V突變病毒對細胞活性的影響
        3.3.4 VP2 A300V對突變病毒增殖規(guī)律的影響
        3.3.5 VP2 A300V突變病毒對感染細胞上清液中病毒滴度的影響
        3.3.6 VP2 A300V突變病毒誘導(dǎo)細胞凋亡的比較
        3.3.7 VP2 A300V突變病毒對細胞周期阻滯作用的比較
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]水貂腸炎細小病毒分離株的分子生物學(xué)特性及其致病性研究[D]. 刁非非.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]肉食動物細小病毒重組疫苗研究[D]. 楊洋.吉林大學(xué) 2013
[3]貉細小病毒分離鑒定及免疫原性研究[D]. 康洪濤.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[4]水貂腸炎細小病毒抗原性分析及其特異性馬源抗體的制備[D]. 左靜.吉林大學(xué) 2011
[5]犬細小病毒基因疫苗的研究[D]. 陳芹.揚州大學(xué) 2004



本文編號：3017990