目前,國內(nèi)外對殼聚糖酶的研究主要集中在產(chǎn)殼聚糖酶菌株的篩選、酶的分離純化及產(chǎn)酶條件優(yōu)化等方面。由于大多微生物產(chǎn)生的殼聚糖酶活性較低,產(chǎn)量高,很難實現(xiàn)工業(yè)化的生產(chǎn)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,殼聚糖酶基因的克隆表達、重組、突變等技術(shù)在酶工程領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。主要包括酶基因的定點突變,化學(xué)修飾改進酶的特性,提高酶活力和表達量等方面。運用基因工程技術(shù)克隆殼聚糖酶基因,分析酶的結(jié)構(gòu),構(gòu)建產(chǎn)殼聚糖酶的重組微生物,是獲得比自然酶活力更高、更穩(wěn)定的工業(yè)酶的有效途徑之一。本實驗以枯草芽孢桿菌基因組DNA為模板,成功克隆出一條殼聚糖酶基因。該基因序列大小831bp,編碼277個氨基酸,理論分子量為31.3kDa,理論等電點為9.51。將該殼聚糖酶基因的DNA片段構(gòu)建到熱激表達載體pHsh中,得到含有殼聚糖酶基因的重組表達載體。將該表達載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌細胞中,通過菌落PCR和測序鑒定,證實了轉(zhuǎn)化的成功,得到了表達殼聚糖酶的重組大腸桿菌。對重組殼聚糖酶的酶學(xué)性質(zhì)進行了研究,得出結(jié)論:殼聚糖酶的最適反應(yīng)溫度為50℃,最適反應(yīng)pH為5.0。對殼聚糖酶的熱穩(wěn)定性研究結(jié)果表明,當溫度為35℃時,相對酶活性為1... 

【文章來源】：東華理工大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

殼寡糖的二級結(jié)構(gòu)

圖 2.1 pHsh 質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖譜Fig. 2.1 pHsh plasmid profiles表 2.2 儀器統(tǒng)計表Table 2.2 instrument statistics試劑 廠家q DNA 聚合酶 TakaRa 公dNTP TakaRa 公NAMarker TakaRa 公質(zhì)分子量標準 TakaRa 公ＤＮＡ提取試劑盒 TakaRa 公膠純化回收試劑盒 天根生物公小量快速提取試劑盒 天根生物公芐靑霉素 天根生物公物（Yeast extract） 購自 Oxiod胨（Trytone） 購自 Oxiod

50bp DNA Marker；1：枯草芽孢桿菌基因組.2 枯草芽胞桿菌基因組 DNA 的瓊脂糖凝膠ay bacillus coli genome DNA agarose gel elec的克隆基因組 DNA 為模板，擴增得到了殼大小的特異性目的片段，該長度的基因


本文編號：2938928