鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer,RA）屬接觸類傳染性疾病,感染多數(shù)禽類,發(fā)病后造成纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎和腦膜炎等癥狀。侵害1-8周齡鴨,對(duì)養(yǎng)鴨業(yè)造成極大威脅。本研究旨在建立一種高效疫苗菌株篩選方法,和傳統(tǒng)疫苗菌株篩選方法相比大幅度降低了工作量和成本,為疫苗研制工作提供有力的技術(shù)手段。具有強(qiáng)致病力的菌株通常免疫保護(hù)效果較好,在某種細(xì)菌研究背景知識(shí)模糊,毒力因子尚不明確時(shí),疫苗菌株的篩選方法通常的是,依次對(duì)各個(gè)分離株進(jìn)行毒力的測(cè)定,常用不同劑量的細(xì)菌感染動(dòng)物,通過(guò)測(cè)定最小致死量（MLD）或半數(shù)致死量(LD₅₀),還可以用最小感染量（MID）或半數(shù)感染量(EID₅₀)來(lái)評(píng)價(jià)。這些方法都需要將臨床分離的細(xì)菌一一測(cè)定,工作量較大,比較費(fèi)時(shí)費(fèi)力,限制了對(duì)比菌株的數(shù)量。因此建立一種高效疫苗菌株篩選方法對(duì)疫苗研制工作有舉足輕重的影響。本研究方法以鴨疫里默氏桿菌為例,以某集團(tuán)實(shí)驗(yàn)室保存的若干RA菌株為樣本,利用鴨疫里默氏桿菌的CRISPR序列作為識(shí)別標(biāo)簽,設(shè)計(jì)引物RAC2-F/RAC2-R并能夠成功擴(kuò)增不同血清型RA... 

【文章來(lái)源】：河北科技師范學(xué)院河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

RA菌落形態(tài)

第二章RA培養(yǎng)鑒定142.3.2結(jié)晶紫染色對(duì)鴨疫里默氏桿菌進(jìn)行結(jié)晶紫染色，鏡檢如圖2-2所示，RA為短小的桿狀，多呈單個(gè)散在排列，或呈雙或短鏈狀排列。在RA培養(yǎng)過(guò)程中，一般易受大腸桿菌污染，結(jié)晶紫染色圖像可較為粗略地驗(yàn)證RA在培養(yǎng)過(guò)程中是否被污染，區(qū)別常見(jiàn)的大腸桿菌污染。但準(zhǔn)確鑒定其細(xì)菌的單一性，還是依靠于PCR鑒定。圖2-2RA結(jié)晶紫染色圖FIG.2-2RAcrystalvioletstaining2.3.3PCR鑒定對(duì)鴨疫里默氏桿菌利用兩對(duì)引物（190F/843R、gyrbp1/gyrbp2）進(jìn)行PCR驗(yàn)證，如圖2-3所示，在644bp和194bp處出現(xiàn)明顯的雙條帶，并且沒(méi)有非特異性條帶的出現(xiàn)。圖2-3PCR擴(kuò)增RA片段FIG.2-3PCRamplificationofRAfragmentM：DNAMarkerDL2000；RA：鴨疫里默氏桿菌

第二章RA培養(yǎng)鑒定142.3.2結(jié)晶紫染色對(duì)鴨疫里默氏桿菌進(jìn)行結(jié)晶紫染色，鏡檢如圖2-2所示，RA為短小的桿狀，多呈單個(gè)散在排列，或呈雙或短鏈狀排列。在RA培養(yǎng)過(guò)程中，一般易受大腸桿菌污染，結(jié)晶紫染色圖像可較為粗略地驗(yàn)證RA在培養(yǎng)過(guò)程中是否被污染，區(qū)別常見(jiàn)的大腸桿菌污染。但準(zhǔn)確鑒定其細(xì)菌的單一性，還是依靠于PCR鑒定。圖2-2RA結(jié)晶紫染色圖FIG.2-2RAcrystalvioletstaining2.3.3PCR鑒定對(duì)鴨疫里默氏桿菌利用兩對(duì)引物（190F/843R、gyrbp1/gyrbp2）進(jìn)行PCR驗(yàn)證，如圖2-3所示，在644bp和194bp處出現(xiàn)明顯的雙條帶，并且沒(méi)有非特異性條帶的出現(xiàn)。圖2-3PCR擴(kuò)增RA片段FIG.2-3PCRamplificationofRAfragmentM：DNAMarkerDL2000；RA：鴨疫里默氏桿菌


本文編號(hào)：2910022