目的:研究永生化成牙本質(zhì)樣細胞（immortalized odontoblastlike cells,iODs）的間充質(zhì)干細胞表型和骨形態(tài)發(fā)生蛋白（Bone m orphogenetic protein,BMP）-2,-4,-6,-7和-9對iODs成骨分化的作用。方法:使用iODs模擬成牙本質(zhì)樣細胞（Odontoblast-like cells,ODs）應(yīng)用于實驗。使用半定量RT-PCR（Reverse TranscriptionPolymerase Chain Reaction）連續(xù)檢測iODs中BMPs的內(nèi)源性表達。使用MTT試劑盒檢測iODs的增殖能力。通過流式細胞術(shù)分析iODs的間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells,MSC）表面標(biāo)志物。重組腺病毒介導(dǎo)的BMP（Ad-BMP）和綠色熒光蛋白（Ad-Green Fluorescent Protein,Ad-GFP）轉(zhuǎn)染iODs。在體外,使用半定量RT-PCR、堿性磷酸酶活性、茜素紅染色及油紅O染色測定檢測iODs的成骨和成脂分化能力。最后,使用micro-CT和組織學(xué)分析評估了體內(nèi)形成的異位礦化組織的體積和密... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

成牙本質(zhì)樣細胞和永生化牙本質(zhì)細胞形態(tài)學(xué)和增殖能力A:形態(tài)學(xué)；B:結(jié)晶紫染色；C:MTT試驗

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文檢測結(jié)果顯示：CD 73 陽性率為 95.65%，CD 90 陽性率為 99.59%，CD 105 陽性率為 28.12%，Nestin 陽性率為 66.12%, CD 31 為陰性表達（圖 2）。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文24由于iODs表達MSC表面標(biāo)志物，因此假設(shè)其具有間充質(zhì)干細胞的多向分化能力，包括具分化為成骨細胞，脂肪細胞和成軟骨細胞的潛能。用Ad-BMPs或Ad-GFP感染iODs，然后通過半定量RT-PCR檢測分析了成骨分化標(biāo)志物（包括OPN、OCN、BSP、MEPE和DMP1）和作為成骨抑制因子的Smad6的表達。在Ad-BMPs或Ad-GFP感染iODs的第3、5、7天，iODs中OPN、OCN、BSP、MEPE和DMP1均被BMPs上調(diào)。作為成骨抑制因子的Smad6，可以通過與Smad4競爭受體激活的Smad1、5和8參與抑制BMP信號通路，在第3天被BMPs上調(diào)，但在第5、7天被BMP下調(diào)（圖3A）。圖3iODs中BMP的內(nèi)源表達和iODs在BMP刺激下成骨相關(guān)基因表達A.BMPs刺激iODs后OPN、OCN、BSP、MEPE、DMP1和Smad6表達；B.iODs的BMPs內(nèi)源性表達Figure3EndogenousexpressionofBMPsiniODsandosteogenicgenesexpressionafteriODsstimulatedbyBMPs.A.ExpressionofOPN,OCN,BSP,MEPE,DMP1andSmad6afteriODsstimulatedbyBMPs;B.EndogenousexpressionofBMPsiniODs通過ALP染色和定量分析評估BMPs對iODs早期礦化能力增強的作用。ALP染

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Use of bone morphogenetic proteins in mesenchymal stem cell stimulation of cartilage and bone repair[J]. Sonia Scarfì.  World Journal of Stem Cells. 2016(01)



本文編號：2900790