目的:探討代謝型谷氨酸受體6對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞吞噬功能的調(diào)節(jié)作用的影響。方法:1.人角質(zhì)形成細(xì)胞體外培養(yǎng)。2.蛋白免疫印跡法檢測(cè)人角質(zhì)形成細(xì)胞系(HaCaT)中代謝型谷氨酸受體6(metabotropic glutamate receptor 6,mGluR6)的表達(dá)。3.慢病毒轉(zhuǎn)染。利用慢病毒轉(zhuǎn)染法下調(diào)mGluR6基因在人角質(zhì)形成細(xì)胞系中的表達(dá),建立低表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株(Lv-shmGluR6)及陰性對(duì)照(Lv-shCon)。5.利用掃描電鏡觀察Lv-shmGluR6組和Lv-shCon組細(xì)胞表面形態(tài),觀察細(xì)胞表面葉狀偽足數(shù)量的變化。6.用免疫熒光染色法處理各組細(xì)胞,用共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞微管蛋白的分布及變化。7.利用熒光微球模擬人角質(zhì)形成細(xì)胞吞噬黑素小體的模型,并用共聚焦顯微鏡觀察吞噬情況。9.用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Lv-shmGluR6組和Lv-shCon組細(xì)胞吞噬熒光微球能力。結(jié)果:1.HaCaT細(xì)胞中存在mGluR6的表達(dá)且表達(dá)量豐富。2.慢病毒轉(zhuǎn)染后HaCaT細(xì)胞中mGluR6蛋白水平明顯降低,mGluR6下調(diào)穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建成功。3.mGluR6下調(diào)后HaCaT細(xì)胞表面葉狀偽足數(shù)量明顯減少。4.mGluR6下調(diào)后HaCaT細(xì)胞微管蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布明顯變化,向細(xì)胞周邊聚集,靠近核周部位明顯減少,靠近細(xì)胞膜部位密集增多。5.mGluR6下調(diào)后HaCaT細(xì)胞吞噬熒光微球的量明顯減少。6.用熒光微球模擬HaCaT細(xì)胞吞噬黑素小體的模型,流式細(xì)胞儀檢測(cè)出mGluR6下調(diào)后其吞噬熒光微球的量減少。結(jié)論:1.HaCaT細(xì)胞中有mGluR6的表達(dá)。2.下調(diào)mGluR6后HaCaT細(xì)胞表面?zhèn)巫銛?shù)量減少。與此同時(shí)細(xì)胞的骨架蛋白分布也發(fā)生明顯變化,在核周的分布減少,多向細(xì)胞邊緣聚集。3.利用熒光微球成功模擬出HaCaT細(xì)胞吞噬黑素小體的模型。證明了HaCaT吞噬作用可能是黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)的一個(gè)重要機(jī)制。4.利用激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀分別定性和定量的檢測(cè)出下調(diào)mGluR6后HaCaT吞噬熒光微球的能力下降。證明了mGluR6可能是影響HaCaT細(xì)胞吞噬作用的因素,發(fā)現(xiàn)了一個(gè)影響黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)的可能的新機(jī)制,為色素性疾病的基因治療提供一個(gè)新的思路。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類(lèi)】：R329.2
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
材料和方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
病例報(bào)告
    摘要
    Abstract
    前言
    病例資料和研究?jī)?nèi)容
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝

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