本文關(guān)鍵詞：水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌遺傳多樣性研究及促生菌篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：植物體內(nèi)存在著具有促進(jìn)植物生長(zhǎng)的內(nèi)生細(xì)菌,可用于開發(fā)微生物肥料,具有促進(jìn)植物生長(zhǎng)、無污染、低成本等優(yōu)點(diǎn)。水黃皮是一種生物質(zhì)能源植物,具有耐高溫、耐旱、耐貧瘠、耐鹽堿等特性。本研究從采自海南省文昌縣紅樹林的水黃皮(Pongamia pinnata)根中分離內(nèi)生細(xì)菌,應(yīng)用BOX-PCR和16S rDNA全序列分析等方法對(duì)其多樣性和系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行了研究。利用Salkowski比色法測(cè)定IAA的分泌量、用鉬銻抗比色法測(cè)定溶解無機(jī)磷的能力、采用改進(jìn)的CAS法測(cè)定分泌鐵載體的能力、利用Ashby培養(yǎng)基和過硫酸鉀氧化法測(cè)定自生固氮能力,進(jìn)而,通過盆栽試驗(yàn)研究了供試細(xì)菌的促生能力。研究結(jié)果如下：1.從水黃皮根中分離出50株內(nèi)生細(xì)菌,BOXAIR-PCR聚類分析和16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析表明,水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌具有豐富的遺傳多樣性。BOXAIR-PCR聚類分析結(jié)果表明,50株內(nèi)生細(xì)菌在82%的相似水平上聚為6個(gè)遺傳群,其中I群包含了58%的菌株；而另外,有7株菌獨(dú)立成群。2.根據(jù)BOXAIR-PCR聚類分析結(jié)果,測(cè)定了13株代表菌株的16S rDNA序列,構(gòu)建了供試菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹,表明水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌主要分布于芽孢桿菌屬(Bacillus)、賴氨酸芽孢桿菌屬(Lysinibacillus)、類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)、棒狀桿菌屬(Corynebacterium)、伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderia)、蒼白桿菌屬(Ochrobactrum)6個(gè)屬,并揭示了水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌具有豐富的遺傳多樣性,且與已知同源菌屬的同源性高(99.2%100%)。鑒定結(jié)果表明,代表菌株G3、G16和G17屬于Bacillus aryabhattai, G4和G6屬于Bacillus thuringiensis,G9屬于Burkholderia anthina,G10和G26屬于Ochrobactrum anthropi,G14屬于Paenibacillus glycanilyticus、G35屬于Corynebacterium callunae,G36屬于Lysinibacillus fusiformis、G39屬于Bacillus subtilis,而G50屬于Bacillus cereus。3.通過對(duì)代表菌株的生物活性測(cè)定,獲得了產(chǎn)IAA、溶磷、分泌鐵載體和自生固氮的內(nèi)生細(xì)菌。結(jié)果表明,13代表菌株均產(chǎn)生IAA(17.55-59.55μg/mL),以G16產(chǎn)量最高,為59.55 μg/mL;有76.9%的代表菌株能分泌鐵載體,鐵載體濃度為6.00-104.50μg/mL,菌株G26產(chǎn)量最高,為104.50μg/mL;G9具有溶無機(jī)磷能力,其溶磷量為4.87μg/mL;G9、G14、G10和G26具有自生固氮能力,固氮量為1.57～6.84μg/mL,以G10固氮能力最強(qiáng),培養(yǎng)液中全氮量達(dá)到6.84μg/mL。對(duì)G3、G9和G10進(jìn)行水黃皮盆栽接種試驗(yàn),結(jié)果表明這3株P(guān)GPB能夠不同程度地促進(jìn)水黃皮的生長(zhǎng),其中G10的促生效果最明顯,水黃皮植株干重和植株含氮量較對(duì)照顯著增加。4.篩選獲得了5株產(chǎn)鐵載體能力強(qiáng)的內(nèi)生細(xì)菌(G3、G9、G10、 G17和G26),其產(chǎn)鐵載體的濃度為41.50～104.50μg/mL;進(jìn)而,盆栽試驗(yàn)驗(yàn)證了這5株內(nèi)生細(xì)菌對(duì)花生的促生效果。結(jié)果表明,接種供試菌株促進(jìn)了花生吸收N、P、K和Fe元素,增加花生植株干重。其中,接種GIO和G26,花生干重增加了6.78和23.72%、植株全氮量增加96.94%和76.53%,植株全磷量增加了17.71%和20.83%,植株全鉀含量增加了16.15%和14.91%,植株全鐵增加了32.14-73.45%。這證明了供試菌株具有良好的促生功能。
【關(guān)鍵詞】：水黃皮 內(nèi)生細(xì)菌 遺傳多樣性 植物促生細(xì)菌(PGPB)
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q93
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 1. 文獻(xiàn)綜述11-21
• 1.1 引言11-12
• 1.2 植物內(nèi)生菌研究進(jìn)展12-16
• 1.2.1 植物內(nèi)生菌的概述12
• 1.2.2 內(nèi)生菌多樣性研究12-15
• 1.2.3 內(nèi)生菌系統(tǒng)發(fā)育研究15-16
• 1.3 植物內(nèi)生促生菌研究現(xiàn)狀16-19
• 1.3.1 植物內(nèi)生促生菌對(duì)植物的促生機(jī)理17-18
• 1.3.2 植物內(nèi)生促生菌的資源開發(fā)與利用18-19
• 1.4 本研究立題依據(jù)及主要研究?jī)?nèi)容19-21
• 1.4.1 立題依據(jù)19-20
• 1.4.2 研究目的20-21
• 2. 水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌遺傳多樣性研究21-34
• 2.1 材料與方法21-24
• 2.1.1 樣品采集21
• 2.1.2 供試儀器21
• 2.1.3 供試試劑及培養(yǎng)基21-22
• 2.1.4 內(nèi)生細(xì)菌分離純化22
• 2.1.5 DNA提取22
• 2.1.6 BOXA1R-PCR指紋圖譜分析22-23
• 2.1.7 代表菌株16S rDNA基因序列分析23-24
• 2.1.8 數(shù)據(jù)分析與處理24
• 2.2 結(jié)果分析24-31
• 2.2.1 供試菌株生長(zhǎng)特性及形態(tài)24-26
• 2.2.2 BOXA1R-PCR指紋圖譜結(jié)果分析26-29
• 2.2.3 代表菌株16S rDNA序列分析29-31
• 2.3 討論31-34
• 3. 水黃皮內(nèi)生細(xì)菌高效促生菌的篩選34-42
• 3.1 材料與方法34-37
• 3.1.1 供試菌株34
• 3.1.2 供試儀器34
• 3.1.3 試劑及培養(yǎng)基34-35
• 3.1.4 水黃皮內(nèi)生細(xì)菌促生活性測(cè)定35-37
• 3.2 結(jié)果分析37-40
• 3.2.1 水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌產(chǎn)IAA活性測(cè)定結(jié)果分析37
• 3.2.2 水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌溶磷活性分析37-38
• 3.2.3 水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌固氮活性分析38
• 3.2.4 水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌分泌鐵載體活性分析38-40
• 3.3 討論40-42
• 4. 水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌促生效果研究42-51
• 4.1 水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌對(duì)水黃皮生長(zhǎng)的影響42-43
• 4.2 產(chǎn)鐵載體細(xì)菌盆栽試驗(yàn)43-44
• 4.3 數(shù)據(jù)處理44-45
• 4.4 結(jié)果分析45-49
• 4.5 討論49-51
• 5. 結(jié)論及展望51-52
• 5.1 結(jié)論51
• 5.2 展望51-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 致謝58-59
• 附錄：代表菌株16S rDNA序列59-65

【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌遺傳多樣性研究及促生菌篩選，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：274827