發(fā)布時間：2019-12-06 15:05

【摘要】：卵清蛋白酶解制備的多肽具有抗氧化、抗菌、抗疲勞等作用,被廣泛應用于食品保健領域。生物活性肽具有促細胞生長的作用,但卵清酶解制備的多肽在細胞培養(yǎng)方面的應用鮮有報道。本文采用高壓酶解法,制備了卵清多肽復合物,研究了其理化性質(zhì)和對貼壁細胞的促生長效果,為卵清多肽在細胞培養(yǎng)方面的應用提供了理論依據(jù)。論文首先簡要介紹了生物活性肽、蛋白水解物和卵清蛋白水解物三個方面的制備方法和研究現(xiàn)狀。其次以水解度為指標,通過酶篩選(堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶)、單因素試驗和正交試驗對高壓酶解卵清蛋白的工藝參數(shù)進行了優(yōu)化。結果表明:胰酶水解效果優(yōu)于其他五種酶,水解最佳工藝為壓力120MPa、溫度50 ℃pH值7.0和酶/底物(E/S)=1:2.5(質(zhì)量比),水解度最高可以達到45.13%。然后對制備的高壓酶解卵清蛋白多肽的理化性質(zhì)進行了研究。結果表明:高壓酶解卵清多肽在pH值2-10之間具有較高的溶解性、熱穩(wěn)定性和起泡性,泡沫穩(wěn)定性較低。氨基酸檢測和分子量檢測證明其水解物中含有大量有益于細胞生長的氨基酸,水解度較高。最后通過細胞傳代培養(yǎng)、生長曲線測試、降血清測試、纖維素介質(zhì)分離純化等方法,檢測了高壓酶解卵清多肽對兩種疫苗生產(chǎn)常用細胞BHK-21細胞和Marc-145細胞的促細胞生長效果。結果表明:添加0.25%卵清多肽后,兩種細胞的最大增殖密度分別為6.69×10~5cells/mL和4.75×10~5cells/mL,是正常培養(yǎng)細胞的1.56倍和1.73倍;細胞倍增時間分別為21.25h和27.94h,比正常培養(yǎng)細胞分別縮短了 6.97h和4.24h。兩種細胞均可以穩(wěn)定傳代15代以上,且生長形態(tài)無明顯變化。試驗還證實:添加0.25%的高壓酶解卵清多肽可以減少細胞培養(yǎng)中的血清含量,這對降低疫苗等生物制品的生產(chǎn)成本具有重要意義。此外,分離純化實驗表明:自制的卵清水解多肽中可能含有抑制細胞生長的物質(zhì)——EH4。如果在高壓酶解卵清多肽中去除EH4后,是否其促細胞生長效果更明顯,有待進一步研究。綜上所述,本研究制備的高壓酶解卵清多肽對兩種動物細胞有促生長活性,具有在大規(guī)模細胞培養(yǎng)中應用的前景和開發(fā)價值。
【學位授予單位】：西北民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q813.1

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本文編號：2570429