【摘要】：螺旋藻因富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素、不飽和脂肪酸及微量元素,已被成功開(kāi)發(fā)應(yīng)用并實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn),但隨著螺旋藻應(yīng)用領(lǐng)域的擴(kuò)大,功能藻株的需求也隨之加強(qiáng),為了獲得優(yōu)良藻株本課題組進(jìn)行了連續(xù)三年的水樣采集,對(duì)樣品的顯微觀察發(fā)現(xiàn),螺旋藻、節(jié)旋藻在渤海海濱及其周圍內(nèi)陸濕地廣泛存在。但由于尚未找到有效的藻株富集方法,且挑取單藻絲進(jìn)行純培養(yǎng)常常遭到失敗,致使一些水樣中的螺旋藻、節(jié)旋藻藻株丟失,未能獲得純培養(yǎng),推測(cè)藻株的生長(zhǎng)受到了水樣理化環(huán)境的影響,因此為了獲得更多的純培養(yǎng)藻株,2015年7月-2015年9月,對(duì)海岸線較長(zhǎng)、濕地類型比較多樣化的渤海濕地及周邊水域進(jìn)行了細(xì)菌、藍(lán)細(xì)菌和真核微型生物多樣性分析,一方面對(duì)分類結(jié)果進(jìn)行補(bǔ)充分析,另一方面為富集條件的選擇提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.對(duì)渤海濕地及周邊水域的18個(gè)采樣點(diǎn)水樣的螺旋藻進(jìn)行計(jì)數(shù),發(fā)現(xiàn)不同來(lái)源水樣中螺旋藻的數(shù)量存在明顯差異;當(dāng)水樣TN和TP分別在4.9-15.8 mg/L和0.1-0.63mg/L之間時(shí),適宜螺旋藻的生長(zhǎng)。2.通過(guò)Illumina HiSeq高通量測(cè)序,18個(gè)采樣點(diǎn)中細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)類群為變形桿菌門(Proteobacteria)、藍(lán)細(xì)菌門(Cyanobacteria)、硬壁菌門(Firmicutes);真核微型生物的優(yōu)勢(shì)類群為輪形動(dòng)物門(Rotifera)、節(jié)肢動(dòng)物門(Arthropoda)、綠藻門(Chlorophyta);藍(lán)細(xì)菌在屬的水平上優(yōu)勢(shì)類群為聚球藻(Synechococcus)、微胞藻屬(Microcystis)、Halanaerobacter、浮絲藻屬(Planktothrix)。分析18個(gè)樣品中微生物樣性差異,河北北戴河濕地(B1)細(xì)菌物種豐度最高,遼寧盤錦紅海灘度假村周邊天然濕地(L1)細(xì)菌種類多樣性最大,內(nèi)蒙古巴哈爾北湖(N2)的細(xì)菌多樣性和物種豐度均最低;河北北戴河濕地(B1)真核微型生物物種豐度最高,天津海河教育園區(qū)天然濕地(T5)真核微型生物物種多樣性最高,內(nèi)蒙古科研鎮(zhèn)天然濕地(N5)的真核微型生物物種豐富度最低,內(nèi)蒙古巴彥淖爾堿湖(N4)的真核微型生物物種多樣性最低;天津海河教育園區(qū)天然池塘(T5)藍(lán)細(xì)菌物種最豐富,北戴河濕地(B1)藍(lán)細(xì)菌多樣性高于其他地方,內(nèi)蒙古索貝爾湖(N3)的藍(lán)細(xì)菌豐富度、多樣性低于其他樣點(diǎn)。通過(guò)測(cè)定18個(gè)樣品的環(huán)境因子,發(fā)現(xiàn)其與藍(lán)細(xì)菌群落分布相關(guān)性由高到低依次是:COD、總氮、pH、氨氮、葉綠素a、DO、溫度、鹽度、總磷。3.以實(shí)驗(yàn)室保存和本人分離純化的98株不同來(lái)源螺旋藻、節(jié)旋藻為對(duì)象,采用細(xì)菌通用引物和藍(lán)細(xì)菌特異引物對(duì)16S rRNA基因進(jìn)行擴(kuò)增,從基因序列的變異位點(diǎn)和平均G+C百分含量來(lái)看,藍(lán)細(xì)菌特異引物擴(kuò)增的16S rRNA基因比細(xì)菌通用引物擴(kuò)增的16S rRNA基因的序列變異程度大,表現(xiàn)出較為豐富的遺傳多樣性。兩種引物構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育NJ樹將螺旋藻、節(jié)旋藻分為三個(gè)類群,但是細(xì)菌通用引物擴(kuò)增的16S rRNA基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育中,藻株TJJ1、TJBC1、TJBC2、TJBC3、TJBC7-4、TJBC8、TJBC14-2、TJSD1屬于節(jié)旋藻屬,但在基于藍(lán)細(xì)菌特異引物擴(kuò)增的16S rRNA基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹中,它們屬于螺旋藻屬。與本課題組前期其它指標(biāo)分子的分類結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)基于psbA基因序列的系統(tǒng)發(fā)育樹中,藻株TJBC1與F-1070、F-351、F-904-2聚集在一起,基于脂肪酸生物標(biāo)記特征指數(shù)的系統(tǒng)發(fā)育樹中,TJBC3與F-351、F-1070聚集在一起,且掃描電鏡結(jié)果從形態(tài)方面也證實(shí)了系統(tǒng)發(fā)育樹分析結(jié)果,因此作者認(rèn)為采用藍(lán)細(xì)菌特異引物擴(kuò)增其16s rRNA基因,依據(jù)該序列同源性區(qū)分螺旋藻、節(jié)旋藻更準(zhǔn)確。4.選取溫度、氨氮、pH、總氮4個(gè)因素,設(shè)置實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)、天津、山東、河北、內(nèi)蒙環(huán)境條件,發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)條件下各藻株的生物量最高,其次藻株來(lái)源地的條件更適合其生長(zhǎng)繁殖,因此,在螺旋藻實(shí)際生產(chǎn)中,要結(jié)合藻株來(lái)源地的環(huán)境和養(yǎng)殖成本,綜合分析獲得最適的養(yǎng)殖條件。
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圖片說(shuō)明： 第二章 藻的分離純化與培養(yǎng)分布比較廣泛，在濕地中的藻類品種亦是繁多，為合理的對(duì)單一對(duì)象螺，需對(duì)濕地水樣中的螺旋藻進(jìn)行分離純化以得到純種來(lái)進(jìn)行理論研究。旋藻分離純化的常用方法有：平板劃線分離法，操作簡(jiǎn)單，但是受藻種制；毛細(xì)管分離法，，操作簡(jiǎn)單、可靠，但操作難度較大；水滴分離法，準(zhǔn)確，但目的性差。驗(yàn)材料與儀器驗(yàn)材料樣品驗(yàn)所用水樣均采自渤海海濱濕地及其周邊水域，采樣工作主要于 2015 年每個(gè)采樣點(diǎn)用采水器取五個(gè)平行樣，采樣水深 20-50 cm，每個(gè)樣品為遠(yuǎn)四次或更多次數(shù)的采集水體的混合樣品，樣品采集后灌入事先經(jīng)過(guò)高溫樣瓶中，將樣品以最短的時(shí)間帶回實(shí)驗(yàn)室，主要采樣地點(diǎn)見(jiàn)圖 2-1。
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圖片說(shuō)明： T6 103～148 127B1 13～28 17B2 19～29 23S1 99～134 112S2 65～82 79L1 121～146 135L2 87～118 107L3 18～42 25N1 187～213 197N2 346～392 364N3 291～332 321N4 145～201 178N5 218～287 255
【學(xué)位授予單位】：天津商業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q949.2;Q93

【參考文獻(xiàn)】

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3 杜瑞芳;李靖宇;趙吉;;烏梁素海湖濱濕地細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)多樣性[J];微生物學(xué)報(bào);2014年10期

4 李瑩;臧淑英;馬大龍;鄂立思;;松江濕地沉積物細(xì)菌T-RFLP分析中PCR體系的建立與優(yōu)化[J];生命科學(xué)研究;2014年04期

5 李潔;張文強(qiáng);金鑫;畢見(jiàn)霖;袁首;單保慶;;環(huán)渤海濱海濕地土壤磷形態(tài)特征研究[J];環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào);2015年04期

6 韓晶;胡文革;王艷萍;武菲;張曉紅;王翠華;;新疆艾比湖濕地博樂(lè)河入口處土壤細(xì)菌多樣性分析[J];微生物學(xué)通報(bào);2014年11期

7 李永強(qiáng);陳清香;師文慶;熊正燁;李思東;李高榮;凌旭煒;;光照對(duì)螺旋藻生長(zhǎng)速率的影響[J];激光生物學(xué)報(bào);2014年01期

8 朱飛舟;陳利玉;陳漢春;;16S rRNA基因序列分析法鑒定病原細(xì)菌[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年10期

9 王梅梅;熊亞南;劉愛(ài)華;章廣玲;;淡水藻類的分離純化方法探索[J];環(huán)境科學(xué)導(dǎo)刊;2013年02期

10 沈梅麗;楊銳;;分子生物學(xué)方法及其在海洋微生物生態(tài)中的應(yīng)用[J];生物技術(shù)通報(bào);2012年10期

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2 王永霞;云南高原程海湖沉積物中的細(xì)菌多樣性研究[D];云南大學(xué);2014年

3 劉欣;膠州灣沉積物細(xì)菌多樣性及菌群時(shí)空分布規(guī)律研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2010年

4 葉文瑾;太湖富營(yíng)養(yǎng)化水體和底泥中微生物群落的分子生態(tài)學(xué)研究[D];上海交通大學(xué);2009年

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2 馮鴿;黃河三角洲濱海濕地放線菌多樣性及活性潛力評(píng)估[D];中國(guó)海洋大學(xué);2013年

3 夏蕊琪;光照強(qiáng)度對(duì)螺旋藻形態(tài)及生理的影響[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 靳志剛;東平湖湖水藍(lán)細(xì)菌多樣性分析及mcyE基因的定量檢測(cè)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

5 劉菲菲;湛江紅樹林灘涂海洋細(xì)菌多樣性的研究[D];廣東海洋大學(xué);2012年

6 張彥茹;內(nèi)蒙古渾善達(dá)克鹽堿湖細(xì)菌多樣性分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 張利蘭;自然濕地水體中微生物多樣性的研究[D];河南師范大學(xué);2011年

8 焦晨;PCR-DGGE法在撫州市西湖水體微生物多樣性研究中的探討[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2010年

9 李珍寧;淡水藻的分離純化與培養(yǎng)及藻體內(nèi)生化成分的測(cè)定研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 吳雪梅;烏伊嶺濕地水生真菌多樣性的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2515844