【摘要】：激活素A(activin A)屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族的多功能生長(zhǎng)和分化因子,在機(jī)體發(fā)育的不同階段以及不同組織中具有不同的生物學(xué)作用,如誘導(dǎo)胚胎早期發(fā)育、促進(jìn)垂體前葉腺細(xì)胞分泌卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、抑制活化巨噬細(xì)胞分泌炎性因子以及誘導(dǎo)B淋巴瘤細(xì)胞凋亡等。激活素A可由免疫系統(tǒng)的多種細(xì)胞產(chǎn)生,并對(duì)免疫細(xì)胞功能具有調(diào)節(jié)作用,如巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞等均可分泌激活素A。小膠質(zhì)細(xì)胞廣泛分布于腦和脊髓中,被認(rèn)為是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中定居的巨噬細(xì)胞。激活素A雖然能影響機(jī)體多種組織來源的巨噬細(xì)胞活性,但對(duì)神經(jīng)來源的巨噬細(xì)胞即小膠質(zhì)細(xì)胞活化的調(diào)控機(jī)制仍未闡明。因此,本論文利用小鼠來源的小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2細(xì)胞,探討激活素A對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素LPS活化BV2細(xì)胞功能的調(diào)控作用及其機(jī)制。1.激活素A抑制LPS活化BV2細(xì)胞的作用本實(shí)驗(yàn)首先采用RT-PCR檢測(cè)激活素A及其受體、信號(hào)傳導(dǎo)蛋白Smads在BV2細(xì)胞中的表達(dá),結(jié)果顯示激活素A、激活素ⅡA型受體(activin typeⅡA receptor,Act RⅡA)、激活素ⅡB型受體(activin typeⅡB receptor,Act RⅡB)、Smad2,3,4 m RNA在BV2細(xì)胞中均有表達(dá),提示激活素A可作用于BV2細(xì)胞發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。研究進(jìn)一步通過Giemsa染色觀察BV2細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,結(jié)果顯示LPS刺激BV2細(xì)胞發(fā)生明顯的形態(tài)學(xué)改變,而激活素A與LPS聯(lián)合作用時(shí),能明顯抑制LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。激活素A單獨(dú)作用BV2細(xì)胞,對(duì)NO分泌及i NOS m RNA表達(dá)無明顯影響,但對(duì)IL-6、IL-1β及TNF-α等的分泌具有明顯抑制作用。LPS作為經(jīng)典的巨噬細(xì)胞活化因子,對(duì)BV2細(xì)胞NO及IL-6、IL-1β、TNF-α等炎性細(xì)胞因子分泌以及i NOS、IL-6、IL-1β、TNF-αm RNA表達(dá)均具有促進(jìn)作用,而激活素A則對(duì)LPS誘導(dǎo)的NO及炎性細(xì)胞因子分泌和m RNA表達(dá)均具有抑制作用。為了進(jìn)一步探討激活素A對(duì)LPS活化BV2細(xì)胞抑制作用的機(jī)制,實(shí)驗(yàn)首先采用RT-PCR檢測(cè)了BV2細(xì)胞激活素信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)分子的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)激活素A和LPS單獨(dú)作用均能誘導(dǎo)Act RⅡA、Act RⅡB及Smad2和Smad3 m RNA表達(dá),而對(duì)Smad4 m RNA表達(dá)無明顯影響;激活素A與LPS二者聯(lián)合作用組與單獨(dú)LPS組相比,Act RⅡA、Act RⅡB及Smad2和Smad3 m RNA表達(dá)水平降低。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPS明顯促進(jìn)BV2細(xì)胞TLR4的表達(dá),而激活素A雖然對(duì)TLR4表達(dá)無明顯影響,但卻能明顯抑制LPS上調(diào)的TLR4表達(dá);而激活素A和LPS均能促進(jìn)TLR2表達(dá),二者聯(lián)合作用更明顯。上述結(jié)果提示激活素A可能通過抑制LPS作用的主要受體TLR4表達(dá),進(jìn)而抑制LPS誘導(dǎo)BV2細(xì)胞活化作用。2.Smad3在BV2細(xì)胞介導(dǎo)激活素A作用的機(jī)制研究Smad3是經(jīng)典的激活素信號(hào)傳導(dǎo)蛋白,上述研究也顯示,激活素A作用BV2細(xì)胞后Smad3 m RNA表達(dá)升高。因此,本研究采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法使BV2細(xì)胞過表達(dá)Smad3,進(jìn)一步檢測(cè)激活素A及LPS對(duì)炎性細(xì)胞因子分泌的影響。結(jié)果顯示,在BV2細(xì)胞過表達(dá)Smad3后,與pc DNA3空質(zhì)粒對(duì)照組比較,IL-6、IL-1β及TNF-αm RNA表達(dá)均升高,LPS作用后,Smad3過表組炎性因子的分泌及表達(dá)也明顯高于LPS刺激的pc DNA3對(duì)照組。同時(shí),BV2細(xì)胞Smad3過表達(dá)后,Act RⅡA和Act RⅡB的表達(dá)明顯增強(qiáng),但對(duì)Smad4的表達(dá)有明顯的抑制作用。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TLR2及TLR4受體的表達(dá)結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPS和激活素A對(duì)Smad3過表達(dá)的BV2細(xì)胞TLR2表達(dá)無明顯影響;Smad3過表達(dá)后,LPS對(duì)TLR4表達(dá)作用明顯增強(qiáng),且激活素A對(duì)LPS誘導(dǎo)的TLR4表達(dá)也有明顯的抑制效應(yīng)。綜上所述,激活素A對(duì)LPS活化BV2細(xì)胞具有明顯的抑制作用,其作用與TLR4表達(dá)及Smad3信號(hào)途徑有關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Alev Deli;Emanuel Kreidl;Stefan Santifaller;Barbara Trotter;Katja Seir;Walter Berger;Rolf Schulte-Hermann;Chantal Rodgarkia-Dara;Michael Grusch;;Activins and activin antagonists in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2008年11期

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本文編號(hào)：2489785