本文關鍵詞： 新型 鵝細小病毒 VP3蛋白 酶聯(lián)免疫吸附試驗 血清學檢測　出處：《河北大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：近年來,一種新型鵝細小病毒(GPV)在我國北方各省鴨群中出現(xiàn)并流行,導致發(fā)病鴨群出現(xiàn)短喙凸舌,生長遲緩等癥狀,命名為鴨短喙侏儒綜合征(BADS)。本研究建立了一種基于新型GPV病毒VP3結構蛋白的間接酶聯(lián)免疫吸附實驗,檢測血清中的GPV抗體。大腸桿菌表達的GPV-VP3衣殼蛋白經(jīng)包涵體粗純化及鎳柱純化,Western blot實驗結果顯示純化后的蛋白可與GPV抗體反應。通過條件優(yōu)化:抗原包被最適濃度為100 ng/孔,4℃過夜包被;使用復合封閉液封閉2 h;最佳一抗稀釋倍數(shù)為1:640,作用時間為1 h;辣根過氧化物酶(HRP)標記抗體稀釋倍數(shù)為1:10000,二抗反應時間為1 h;TMD顯色時間為15 min,建立了一種基于VP3蛋白檢測新型GPV抗體的間接ELISA方法。特異性檢測顯示,該方法不與新城疫病毒、鴨肝炎病毒、鴨源呼腸孤病毒、禽流感病毒和傳染性法氏囊病毒有交叉反應;靈敏性檢測結果顯示:待測血清10240倍稀釋后,仍可良好檢出GPV特異性抗體;臨床樣品檢測評價顯示:80份血清樣本用血清中和試驗(SN)和建立的ELISA方法平行檢測。結果顯示兩種方法檢測都為陽性的有32份,陰性的有48份,符合率為88.75%。該VP3-ELISA方法有高靈敏度和特異性,是一種檢測血清中GPV抗體的有效的血清學檢測方法。
[Abstract]:In recent years, a new type of goose parvovirus (GPVV) has been found and prevalent in duck populations in northern provinces of China, resulting in symptoms such as short beak protruding tongue and growth retardation. This study established an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) based on a novel GPV virus VP3 structural protein. Detection of GPV antibody in serum. The GPV-VP3 capsid protein expressed by Escherichia coli was purified by inclusion body and purified by nickel column. The results showed that the purified protein could react with GPV antibody. The degree is 100ng / pore 4 鈩，

本文編號：1509024