發(fā)布時間：2018-01-06 20:30

  本文關鍵詞：山東地區(qū)死亡鴨胚中細菌分離鑒定及沙門氏菌耐藥性與毒力基因檢測　出處：《山東農業(yè)大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：沙門氏菌是一種重要的食源性致病菌,具有廣泛的宿主性,作為人畜共患病其成為危害養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展最為嚴重的病原菌之一,尤其在種鴨養(yǎng)殖過程中沙門氏菌可以通過種蛋垂直傳播。自2014年至2016年,山東規(guī)�；N鴨孵化場的胚胎死亡率和弱雛率明顯升高,并且死亡鴨胚的類型以臭蛋為主,初步懷疑是大面積細菌感染所致。由于抗菌藥物在畜禽疾病防治中的大量使用,使得沙門氏菌對抗生素的耐藥率不斷上升,特別是多重耐藥現(xiàn)象的不斷出現(xiàn),給沙門氏菌病的有效防治帶來了困難。本實驗旨在研究死亡鴨胚中病原菌的感染狀況,以探究鴨胚在孵化過程中死亡原因;通過藥敏試驗和耐藥基因檢測,初步掌握鴨源沙門氏菌在山東的耐藥情況,探究耐藥情況與臨床常用抗菌藥的相互關系,為指導生產中種鴨的合理用藥提供理論依據(jù);分析鴨源沙門氏菌毒力基因,對沙門氏菌致病性影響,研發(fā)安全有效的疫苗奠定基礎。本研究共分四部分。1.死亡鴨胚中細菌的分離鑒定通過對無破損的死亡鴨胚進行細菌分離培養(yǎng)、形態(tài)染色、16SrDNA鑒定等方法,從12個批次,315枚鴨胚中共分得細菌282株,分屬26個種,其中245枚存在細菌感染,感染率為77.8%。在分離的所有細菌中,大腸桿菌、沙門氏菌和奇異變形桿菌分別占38.30%(108/282)、26.24%(74/282)和8.16%(23/282),是死亡鴨胚中的主要致病菌群。結果表明,造成種鴨孵化場胚胎死亡率和弱雛率明顯升高的主要原因是細菌感染所致,且沙門氏菌是主要的致病菌之一。2.鴨源沙門氏菌耐藥性調查采用K-B法對74株鴨源沙門氏菌進行17種抗生素(氨基糖苷類藥物、喹諾酮類藥物、β-內酰胺類藥物等)的耐藥性檢測。結果顯示,74株沙門氏菌對17種抗生素表現(xiàn)出不同程度的耐藥:β-內酰胺類藥物的耐藥性較高,氨芐西林耐藥率31.08%,頭孢噻吩耐藥率29.73%;氨基糖苷類藥物中慶大霉素的耐藥率最高占22.97%,其次是鏈霉素9.46%和卡那霉素2.70%;喹諾酮類藥物耐藥率較低,環(huán)丙沙星和諾氟沙星耐藥率均為4.05%,氧氟沙星耐藥率為2.70%;四環(huán)素和氯霉素類藥物耐藥率均較低分別為5.41%和4.05%。在分離的74株沙門氏菌中兩種藥物以上多重耐藥菌株的耐藥率占78.37%。該項研究調查表明,在治療和預防山東地區(qū)種鴨孵化場致病性細菌感染時可以選擇性配合使用喹諾酮類藥物和卡那霉素,在選擇使用喹諾酮類藥物時,要按照生產具體情況和藥物使用說明書嚴格控制劑量。3.鴨源沙門氏菌耐藥基因的檢測與鑒定對鑒定的74株沙門氏菌進行氨基糖苷類鈍化酶基因三重PCR檢測,該74株沙門中有13株擴增出ant(3’’)-Ia、aac(6’)-Ib、aph(3’)-IIa的特異性條帶,三重基因攜帶率17.56%,16S甲基化酶基因未檢出;喹諾酮類耐藥菌株PCR擴增結果表明,qnrS基因攜帶率14.85%,oqxA基因攜帶率9.46%,oqxB基因攜帶率2.70%,qnrA、qnrB、qnrC和qnrD基因未檢出;β-內酰胺類耐藥基因TEM基因攜帶率27.03%。本研究結果表明氨基糖苷類鈍化酶基因、喹諾酮基因和β-內酰胺基因廣泛存在于鴨源沙門氏菌中,其耐藥性與檢測的耐藥基因符合率存在差異不呈顯著的相關性。4.鴨源沙門氏菌毒力基因的檢測與鑒定對鑒定的74株沙門氏菌進行8種毒力基因PCR檢測,SPI-1、SPI-3、SPI-4、SPI-5、stn和invJ的檢出率分別是81.19%、94.59%、94.59%、79.73%、100%和66.22%。SPI-2和fim未檢出。74株沙門氏菌中,僅攜帶2種毒力基因菌株占所有菌株的2.7%,5種毒力基因與6種毒力基因菌株分別占所有菌株的31.06%和56.76%。本研究結果表明,山東地區(qū)鴨胚中沙門氏菌分離株普遍攜帶有多種毒力島核心蛋白基因,這可能是導致孵化過程中鴨胚死亡的原因之一,而沙門氏菌毒力基因與致病性的關系有待于進一步研究。
[Abstract]:This study was conducted to study the drug resistance of Salmonella in Shandong province . The results showed that the drug resistance rate of Salmonella in Shandong province was higher than that in Shandong province .

【學位授予單位】：山東農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.61

【參考文獻】

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本文編號：1389436