本文關(guān)鍵詞：出芽短梗霉轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析及普魯蘭糖合成相關(guān)基因功能研究　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 出芽短梗霉 普魯蘭糖合成 轉(zhuǎn)錄水平 載體構(gòu)建 基因敲除

【摘要】：普魯蘭糖是一種由出芽短梗霉產(chǎn)生的線性胞外多糖。由于其獨特的化學(xué)性質(zhì)和物理結(jié)構(gòu)被廣泛應(yīng)用于食品、工業(yè)、醫(yī)藥等領(lǐng)域。出芽短梗霉合成普魯蘭糖是一個復(fù)雜的過程。為了研究普魯蘭糖的生物合成機理,本試驗測定了出芽短梗霉轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。篩選出普魯蘭糖合成相關(guān)基因,同時測定其轉(zhuǎn)錄水平,完成進一步篩選。此外通過構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子P1的表達載體獲取純化蛋白,探索與普魯蘭糖合成相關(guān)候選基因的互作。最后通過構(gòu)建P1敲除體系進一步驗證其基因功能。本試驗得出以下結(jié)論:(1)對本課題組保藏的一株出芽短梗霉野生型菌株NG進行轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,結(jié)果顯示,NG共有13,705個Unigenes,平均長度為1457bp。此外,對NG的Unigenes進行了生物信息學(xué)分析,通過對GO、KOG和KEGG的功能注釋,篩選出與普魯蘭糖合成相關(guān)的基因,包括7個葡糖基轉(zhuǎn)移酶基因和1個焦磷酸化酶基因。為研究普魯蘭糖的生物合成和分子生物學(xué)機理提供理論參考。(2)利用RT-qPCR測定NG中的7個葡糖基轉(zhuǎn)移酶候選基因和1個焦磷酸化酶候選基因在YAD、YPD、YND三種培養(yǎng)條件下的表達水平,結(jié)果顯示與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)一致,并驗證了轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的可靠性。利用RT-qPCR測定UVMU3-1不同時間段8個候選基因的轉(zhuǎn)錄水平,最終篩選出5個葡糖基轉(zhuǎn)移酶基因(comp5913、comp8271、comp8503、comp11697和comp6663)和1個焦磷酸化酶基因(comp6817)與多糖合成呈正相關(guān),進一步推測6個候選基因與普魯蘭糖合成相關(guān)。(3)本試驗成功構(gòu)建與出芽短梗霉細胞分化及多糖合成相關(guān)基因P1(comp14856,1164bp)的表達載體,并成功誘導(dǎo),獲得純化的P1蛋白。為探索P1蛋白與6個候選基因之間的互作關(guān)系,驗證其轉(zhuǎn)錄因子功能打下了基礎(chǔ)。(4)通過構(gòu)建P1基因上下游同源臂片段,成功獲得P1敲除載體,但農(nóng)桿菌侵染并沒有成功,可能是質(zhì)粒選取不當或侵染條件不合適導(dǎo)致的,有待進一步試驗。轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的獲得和普魯蘭糖合成相關(guān)基因的篩選為研究普魯蘭糖的代謝調(diào)控和合成機理提供了有價值的數(shù)據(jù),P1蛋白的成功表達為研究出芽短梗霉的細胞分化和多糖合成提供了重要信息,以上試驗結(jié)果為從分子水平提高普魯蘭糖的產(chǎn)量奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：Q93

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