本文關(guān)鍵詞：海南龍血樹查爾酮異構(gòu)酶基因（DcCHI）的克隆及其啟動子功能分析　出處：《黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：血竭是龍血樹植物中所產(chǎn)生的一種紅色樹脂。作為一種傳統(tǒng)的中藥,血竭在東亞和東南亞地區(qū)已被廣泛應(yīng)用。目前對血竭的化學(xué)成分和藥理活性的研究已報道很多。血竭的主要活性成分為類黃酮類化合物,但相關(guān)龍血樹中類黃酮化合物生物合成及調(diào)控的分子機制的研究較少。血竭是其基源植物所產(chǎn)生的紅色樹脂提取而成。血竭的基源植物分布于龍舌蘭科龍血樹屬、棕櫚科黃藤屬、大戟科巴豆屬和豆科紫檀屬。本研究中的海南龍血樹為龍舌蘭科龍血樹屬植物。本研究從海南龍血樹中克隆了一個類黃酮生物合成途徑中的關(guān)鍵酶查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase,CHI)基因及其啟動子,并進(jìn)行了相關(guān)的表達(dá)調(diào)控研究,為今后研究海南龍血樹類黃酮化合物的生物代謝途徑奠定了基礎(chǔ)。DcCHI開放閱讀框長為642bp,編碼213個氨基酸,分子式為C1081H1684N270O322S6,相對分子質(zhì)量為23.8 KD,推導(dǎo)的PI值為4.97,蛋白不穩(wěn)定系數(shù)為46.98,脂肪系數(shù)為91.60,親水系數(shù)(GRAVY)為-0.053。所有氨基酸中Glu含量最多,Cys含量最少。經(jīng)BLASTP比對,發(fā)現(xiàn)其在氨基酸水平上與中國水仙、虎眼萬年青的查爾酮異構(gòu)酶同源性高達(dá)70%以上。對DcCHI蛋白與其他物種進(jìn)行進(jìn)化樹分析,發(fā)現(xiàn)海南龍血樹查爾酮異構(gòu)酶基因?qū)儆赥ypeⅣ型。利用實時熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)DcCHI在葉中表達(dá)量最高,而在莖和花中表達(dá)量較低。6-BA和Me JA能夠誘導(dǎo)DcCHI的表達(dá)。無機鹽誘導(dǎo)劑處理顯著加強了DcCHI的表達(dá)。構(gòu)建了DcCHI的原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌中表達(dá),獲得了純化的DcCHI蛋白。高效液相體外酶活性分析表明DcCHI可以將柚皮素查爾酮催化為柚皮素,這是首次發(fā)現(xiàn)TypeⅣ型中的查爾酮異構(gòu)酶具有活性。通過Genome Walker獲得了1018bp的DcCHI啟動子序列。通過瞬時表達(dá)體系分析發(fā)現(xiàn)Me JA和6-BA對DcCHI啟動子活性有明顯的促進(jìn)作用,而ABA和IAA對DcCHI啟動子有一定的影響,但無明顯作用。酵母單雜結(jié)果表明DcCHI啟動子分別與轉(zhuǎn)錄因子Dcb HLH1、Dcb HLH5之間有互作關(guān)系,說明Dcb HLH1、Dcb HLH5能夠調(diào)控DcCHI的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：Q943.2

【參考文獻(xiàn)】

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