發(fā)布時(shí)間：2017-12-17 21:26

  本文關(guān)鍵詞：曼氏無(wú)針烏賊NPYR-like基因克隆及表達(dá)分析

  更多相關(guān)文章： 曼氏無(wú)針烏賊 神經(jīng)肽Y受體 基因克隆 亞細(xì)胞定位 表達(dá)分析

【摘要】：曼氏無(wú)針烏賊(Sepiella japonica)是我國(guó)重要的海洋經(jīng)濟(jì)物種,現(xiàn)人工養(yǎng)殖發(fā)展迅速,但隨之出現(xiàn)性早熟、個(gè)體偏小等現(xiàn)象,嚴(yán)重影響其養(yǎng)殖效益。因此研究烏賊生長(zhǎng)及生殖發(fā)育調(diào)控機(jī)制是解決這一問(wèn)題的關(guān)鍵。神經(jīng)肽Y受體(Neuropeptide Y receptor,NPYR)是典型的G蛋白偶聯(lián)受體,在許多動(dòng)物的攝食生長(zhǎng)和發(fā)育繁殖中扮演著重要角色。本論文采用分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)方法,分析曼氏無(wú)針烏賊神經(jīng)肽Y-like(Sepiella japonica NPYR-like,Sj NPYR-like)基因的序列特征、受體類型、亞細(xì)胞定位、組織分布特征、在攝食中的調(diào)控功能及在生長(zhǎng)周期中的變動(dòng)規(guī)律。主要取得的研究結(jié)果如下:采用RACE克隆技術(shù)獲得了Sj NPYR-like的全長(zhǎng)序列,并對(duì)其序列特征進(jìn)行了分析,結(jié)果表明,Sj NPYR-like c DNA序列(KX683395)全長(zhǎng)1,902 bp,包含492 bp的5'UTR、228 bp的3'UTR和1,182 bp的ORF,可編碼393個(gè)氨基酸。與其他G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)構(gòu)類似,Sj NPYR-like擁有七個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域TM1(AA36-58)、TM2(AA79-101)、TM3(AA111-133)、TM4(AA145-167)、TM5(200-222)、TM6(AA254-271)和TM7(AA286-308)。利用系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析發(fā)現(xiàn),Sj NPYR-like與脊椎動(dòng)物中神經(jīng)肽Y受體(Neuropeptide Y receptor,NPYR)的三支亞型(NPYR-1、NPYR-2和NPYR-5)具有同源性,與無(wú)脊椎動(dòng)物中神經(jīng)肽F受體(Neuropeptide F receptor,NPFR)聚為一支。經(jīng)多序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),其與預(yù)測(cè)的真鞘NPYR序列同源性高達(dá)81%。利用細(xì)胞生物學(xué)研究方法,對(duì)Sj NPYR-like受體細(xì)胞定位進(jìn)行分析,結(jié)果表明,通過(guò)構(gòu)建Sj NPYR-EGFP表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞中,用熒光染料Di I染膜、DAPI染核,在激光共聚焦顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)Sj NPYR-like定位于細(xì)胞膜上,與Sj NPYR-like序列中存在七次跨膜結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)結(jié)果相一致,表明Sj NPYR-like是一個(gè)膜受體,為下一步功能驗(yàn)證奠定了基礎(chǔ)。通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)分析了Sj NPYR-like m RNA在不同生殖階段曼氏無(wú)針烏賊組織中的表達(dá)特征。結(jié)果表明,Sj NPYR-like基因在曼氏無(wú)針烏賊腦、性腺和肝等組織中有較高的表達(dá)量,在其他組織中表達(dá)量相對(duì)較低。Sj NPYR-like的表達(dá)在曼氏無(wú)針烏賊的生長(zhǎng)發(fā)育周期中存在明顯的變化;在卵原細(xì)胞階段、原生質(zhì)生長(zhǎng)階段和間質(zhì)生長(zhǎng)階段,Sj NPYR-like表達(dá)量在卵子發(fā)生過(guò)程中顯著上升(P0.05),到發(fā)育成熟階段即營(yíng)養(yǎng)質(zhì)生長(zhǎng)階段Sj NPYR-like表達(dá)量則顯著下降。Sj NPYR-like表達(dá)量變化特征研究結(jié)果說(shuō)明其在烏賊生殖發(fā)育中可能具有一定的調(diào)控功能。綜上所述,本論文克隆了曼氏無(wú)針烏賊NPYR-like基因,并對(duì)其亞細(xì)胞定位和生理實(shí)驗(yàn)做了初步的研究,為進(jìn)一步研究曼氏無(wú)針烏賊神經(jīng)肽受體信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制以及生理功能奠定了基礎(chǔ),并為解決人工養(yǎng)殖條件下曼氏無(wú)針烏賊個(gè)體小、性早熟等問(wèn)題提供了一定的理論參考。
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S917.4;Q78

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李繼姬;郭寶英;吳常文;;浙江海域曼氏無(wú)針烏賊資源演變及修復(fù)路徑探討[J];浙江海洋學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年05期

2 周超;郭寶英;劉慧慧;吳常文;;曼氏無(wú)針烏賊(Sepiella maindroni)ALSM基因的克隆及序列分析[J];海洋與湖沼;2012年04期

3 鄭微云,紫敏娟;無(wú)針烏賊視網(wǎng)膜電圖適應(yīng)特性電生理研究[J];海洋科學(xué);1981年04期

4 柴敏娟,鄭微云;無(wú)針烏賊色覺(jué)的初步探討[J];海洋科學(xué);1983年01期

5 倪正雅,徐漢祥;東海曼氏無(wú)針烏賊種群的研究[J];海洋科學(xué);1985年04期

6 張建設(shè);吳常文;�？姑�;蘇永全;;曼氏無(wú)針烏賊血細(xì)胞形態(tài)觀察及吞噬性能的研究[J];海洋科學(xué);2007年11期

7 吳常文;周超;郭寶英;張建設(shè);;浙江近海曼氏無(wú)針烏賊(Sepiella maindroni)繁殖生物學(xué)特性變化研究[J];海洋與湖沼;2012年04期

8 張寶琳,孫道元,畢洪生,吳耀泉,黃勃;膠州灣及鄰近水域曼氏無(wú)針烏賊的生長(zhǎng)和季節(jié)分布[J];海洋科學(xué);1997年05期

9 張建設(shè);吳常文;�？姑�;蘇永全;;曼氏無(wú)針烏賊血細(xì)胞形態(tài)及分類[J];廈門大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年01期

10 吳常文;董智勇;遲長(zhǎng)鳳;丁峰;;曼氏無(wú)針烏賊(Sepiella maindroni)繁殖習(xí)性及其產(chǎn)卵場(chǎng)修復(fù)的研究[J];海洋與湖沼;2010年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 宋微微;王春琳;母昌考;;曼氏無(wú)針烏賊墨汁黑色素形成分子機(jī)理的初步研究[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

2 尹飛;彭士明;孫鵬;范帆;施兆鴻;;硫化物急性毒性對(duì)曼氏無(wú)針烏賊幼體血液生理生化指標(biāo)的影響[A];2010年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

3 鄭小東;肖述;陳兵;王如才;;曼氏無(wú)針烏賊Sepiella maindroni COI和16S rRNA基因序列研究[A];貝類學(xué)論文集（第Ⅸ輯）[C];1999年

4 鄭小東;肖述;陳兵;王如才;;曼氏無(wú)針烏賊Sepiella maindroni COI和16S rRNA基因序列研究(英文)[A];中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)、中國(guó)海洋湖沼學(xué)會(huì)貝類學(xué)分會(huì)第五次代表大會(huì)暨第九次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];1999年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 封乃新;一切為了曼氏無(wú)針烏賊[N];中國(guó)特產(chǎn)報(bào);2008年

2 周權(quán);浙江曼氏無(wú)針烏賊放流喜迎豐收[N];中國(guó)漁業(yè)報(bào);2009年

3 王量迪;寧波攻克人工繁養(yǎng)墨魚(yú)世界難題[N];中國(guó)漁業(yè)報(bào);2004年

4 本報(bào)記者 鄭嵐嵐　通訊員 蔡國(guó)旗;人工養(yǎng)殖日本無(wú)針烏賊成功[N];湛江日?qǐng)?bào);2011年

5 徐磊 彭汐;寧德成功規(guī)�；斯ゐB(yǎng)殖曼氏無(wú)針烏賊[N];中國(guó)漁業(yè)報(bào);2013年

6 國(guó)榮邋祖賢 浙海;吳常文：從少年漁夫到海洋漁業(yè)專家[N];中國(guó)漁業(yè)報(bào);2007年

7 記者 王曉敏;絕跡23年的烏賊資源有望恢復(fù)[N];舟山日?qǐng)?bào);2011年

8 記者 沈朝暉邋通訊員 張永慶;三年內(nèi)市民可嘗十多個(gè)海產(chǎn)新品種[N];寧波日?qǐng)?bào);2008年

9 柴國(guó)榮邋徐祖賢;吳常文：從少年漁夫到海洋漁業(yè)專家[N];中國(guó)經(jīng)濟(jì)時(shí)報(bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張建設(shè);曼氏無(wú)針烏賊養(yǎng)殖生物學(xué)特性和血細(xì)胞免疫功能研究[D];廈門大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉婉;曼氏無(wú)針烏賊雌激素受體基因的克隆、表達(dá)及生殖調(diào)控功能初探[D];浙江海洋大學(xué);2016年

2 徐玉超;曼氏無(wú)針烏賊NPYR-like基因克隆及表達(dá)分析[D];浙江海洋大學(xué);2017年

3 于新秀;曼氏無(wú)針烏賊（Sepiella maindroni）腦結(jié)構(gòu)及促性腺激素釋放激素免疫組織化學(xué)定位研究[D];浙江海洋學(xué)院;2011年

4 葉素蘭;人工養(yǎng)殖曼氏無(wú)針烏賊繁殖生物學(xué)及生殖生物學(xué)研究[D];浙江工業(yè)大學(xué);2009年

5 葉坤;曼氏無(wú)針烏賊配合飼料中蛋白質(zhì)和脂肪需要量的研究[D];集美大學(xué);2012年

6 平洪領(lǐng);溫度和光照對(duì)曼氏無(wú)針烏賊繁殖性能的影響[D];浙江海洋學(xué)院;2015年

7 陸偉進(jìn);曼氏無(wú)針烏賊消化系統(tǒng)組織細(xì)胞學(xué)和酶化學(xué)的研究[D];寧波大學(xué);2012年

8 吳璋;曼氏無(wú)針烏賊微衛(wèi)星位點(diǎn)篩選及群體多態(tài)性分析[D];寧波大學(xué);2011年

9 羅云云;植物蛋白替代魚(yú)粉在曼氏無(wú)針烏賊配合飼料中的應(yīng)用研究[D];集美大學(xué);2013年

10 葉德鋒;曼氏無(wú)針烏賊精子包裝、傳遞及儲(chǔ)存研究[D];浙江海洋學(xué)院;2011年

，

本文編號(hào)：1301617