隨著環(huán)境污染問題的日益嚴(yán)重,環(huán)境中的病原微生物在人們的生活中到處可見,因?qū)ζ鋰?yán)重性以及危害性的忽視,所以經(jīng)常出現(xiàn)由致病菌引起的傳染性疾病的爆發(fā)事件。傳統(tǒng)的微生物學(xué)檢驗(yàn)方法已不能滿足這種突發(fā)性與規(guī)模性疾病檢測(cè)的需要,所以,亟需開發(fā)出準(zhǔn)確、快速、高效的環(huán)境中病原微生物的檢測(cè)技術(shù)。此外,城鎮(zhèn)污水處理廠污泥產(chǎn)量的劇增與普遍未得到有效處理處置的現(xiàn)狀,同樣成為十分嚴(yán)峻的環(huán)境問題。污泥中含有大量的病原微生物、重金屬以及持久性有機(jī)物等有毒有害物質(zhì),可能會(huì)對(duì)地下水、土壤等造成二次污染,嚴(yán)重威脅到環(huán)境安全與人們的健康。所以,污泥有效的處理和處置問題,亦成為了眾多環(huán)保人士關(guān)注的焦點(diǎn)。 本課題組在熒光分析檢測(cè)方面有著扎實(shí)的研究基礎(chǔ),同時(shí)對(duì)卟啉及卟啉衍生物的合成與應(yīng)用等方面同樣開展了大量的基礎(chǔ)性研究,并取得了一定的研究成果。基于上述兩大環(huán)境問題以及本課題組的研究基礎(chǔ),本論文對(duì)環(huán)境中病原微生物的快速檢測(cè)方法以及對(duì)剩余污泥的減量化方面進(jìn)行探討,研究的具體內(nèi)容主要有以下五部分： (1)建立了一種基于雙探針串聯(lián)DNA雜交以及時(shí)間分辨熒光分析法的大腸桿菌的快速檢測(cè)方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,固定在玻片表面的最佳捕獲探針濃度為1....

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
插圖索引
附表索引
第1章 緒論
    1.1 熒光分析法
        1.1.1 熒光
        1.1.2 熒光光譜
        1.1.3 熒光材料
        1.1.4 熒光分析法概述
    1.2 熒光分析法在環(huán)境樣品檢測(cè)中的應(yīng)用
        1.2.1 同步熒光分析技術(shù)在環(huán)境樣品檢測(cè)中的應(yīng)用
        1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在環(huán)境樣品檢測(cè)中的應(yīng)用
        1.2.3 時(shí)間分辨熒光技術(shù)在環(huán)境樣品檢測(cè)中的應(yīng)用
        1.2.4 熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)在環(huán)境樣品檢測(cè)中的應(yīng)用
        1.2.5 熒光偏振分析技術(shù)在環(huán)境樣品檢測(cè)中的應(yīng)用
    1.3 環(huán)境中病原微生物的檢測(cè)方法
        1.3.1 病原微生物概況
        1.3.2 傳統(tǒng)的病原微生物檢測(cè)方法
        1.3.3 現(xiàn)有的病原微生物快速檢測(cè)技術(shù)
    1.4 仿生酶技術(shù)
        1.4.1 酶的概述
        1.4.2 細(xì)胞色素P450單加氧酶
        1.4.3 金屬卟啉仿生酶
    1.5 城市剩余污泥處理現(xiàn)狀
        1.5.1 污泥的理化特性
        1.5.2 污泥的危害
        1.5.3 城市污泥處理處置技術(shù)
        1.5.4 外加酶技術(shù)在污泥厭氧消化中的研究現(xiàn)狀
    1.6 本文構(gòu)想
第2章 基于長(zhǎng)壽命熒光銪配合物的環(huán)境介質(zhì)中大腸桿菌檢測(cè)方法研究
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及原料
        2.2.3 菌種來源
        2.2.4 培養(yǎng)基的配方
        2.2.5 緩沖溶液的配制
        2.2.6 寡核苷酸探針的設(shè)計(jì)與合成
        2.2.7 雙探針串聯(lián)雜交模式的建立
        2.2.8 捕獲探針的固定
        2.2.9 識(shí)別探針的固定
        2.2.10 核酸的提取方法
        2.2.11 雙探針串聯(lián)與目標(biāo)DNA的雜交實(shí)驗(yàn)
        2.2.12 雜交結(jié)果的檢測(cè)
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 捕獲探針濃度的影響
        2.3.2 雜交溫度的影響
        2.3.3 雜交時(shí)間的影響
        2.3.4 洗滌時(shí)間的影響
        2.3.5 雜交體系特異性分析
        2.3.6 雜交體系的靈敏度分析
        2.3.7 初步應(yīng)用研究
    2.4 本章小結(jié)
第3章 基于長(zhǎng)壽命熒光銪配合物的食品中金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法研究
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 菌種來源
        3.2.4 培養(yǎng)基配方
        3.2.5 緩沖溶液的配制
        3.2.6 寡核苷酸探針的設(shè)計(jì)與合成
        3.2.7 雜交模型的建立
        3.2.8 捕獲探針的固定
        3.2.9 識(shí)別探針的固定
        3.2.10 核酸的提取方法
        3.2.11 雜交實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 雜交溫度的優(yōu)化
        3.3.2 雜交時(shí)間的優(yōu)化
        3.3.3 洗滌時(shí)間的優(yōu)化
        3.3.4 雜交特異性分析
        3.3.5 雜交體系的靈敏度分析
        3.3.6 食物樣品的檢測(cè)
        3.3.7 與其他類似方法的對(duì)比
    3.4 本章小結(jié)
第4章 基于長(zhǎng)壽命發(fā)光核殼型納米顆粒的環(huán)境病原微生物檢測(cè)方法研究
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
        4.2.2 銪配合物納米顆粒的制備
        4.2.3 寡核苷酸探針的設(shè)計(jì)與合成
        4.2.4 捕獲探針的固定
        4.2.5 識(shí)別探針的固定
        4.2.6 核酸的提取方法
        4.2.7 基于時(shí)間分辨熒光法的DNA雜交模型
        4.2.8 雜交過程與結(jié)果檢測(cè)
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 正相微乳液法制備的納米顆粒的表征
        4.3.2 反相微乳液法制備的納米顆粒的表征
        4.3.3 反相微乳液法制備IgG修飾銪配合物納米顆粒的表征
        4.3.4 IgG修飾銪配合物納米顆粒在溶液中的泄漏檢測(cè)
        4.3.5 基于IgG修飾銪配合物納米顆粒標(biāo)記的病原微生物DNA檢測(cè)方法的
        靈敏度實(shí)驗(yàn)
    4.4 本章小結(jié)
第5章 基于水溶性萘酰亞胺的熒光共振能量轉(zhuǎn)移的核酸競(jìng)爭(zhēng)雜交檢測(cè)
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.3 透析帶的處理
        5.2.4 DNA探針的前處理及存儲(chǔ)
        5.2.5 瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
        5.2.6 雜交過程
        5.2.7 結(jié)果檢測(cè)
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 Donor probe與EEN染料的有效連接
        5.3.2 Donor及Acceptor探針雜交后熒光能量轉(zhuǎn)移的可行性
        5.3.3 基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的待測(cè)目標(biāo)DNA檢測(cè)
        5.3.4 供體染料與受體染料的距離對(duì)熒光共振能量轉(zhuǎn)移的影響
    5.4 本章小結(jié)
第6章 基于金屬鐵卟啉的仿生酶技術(shù)在剩余污泥消解過程的應(yīng)用
    6.1 前言
    6.2 材料與方法
        6.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        6.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        6.2.3 四-(4-氨基苯基)卟啉(TAPP)的合成與表征
        6.2.4 金屬鐵卟啉Fe(TAPP)Cl的合成
        6.2.5 金屬鐵卟啉Fe(TAPP)Cl的固載
        6.2.6 剩余污泥的來源
        6.2.7 檢測(cè)與分析方法
    6.3 結(jié)果與討論
        6.3.1 金屬鐵卟啉Fe(TAPP)Cl的表征
        6.3.2 玻璃球表面固載鐵卟啉處理剩余污泥的結(jié)果檢測(cè)
        6.3.3 鐵卟啉乙醇液處理剩余污泥的結(jié)果檢測(cè)
        6.3.4 處理時(shí)間的優(yōu)化結(jié)果
        6.3.5 處理溫度的優(yōu)化結(jié)果
        6.3.6 鐵卟啉投加量的優(yōu)化結(jié)果
    6.4 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄A 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文目錄
附錄B 攻讀學(xué)位期間申請(qǐng)與獲得授權(quán)的專利目錄
附錄C 攻讀學(xué)位期間參與的科研項(xiàng)目



本文編號(hào)：3965493