軟骨藻酸(Domoic acid,DA)是由海洋硅藻中的某些擬菱形藻屬產生的一種生物毒素,人類若食用被這種毒素污染的魚貝類等海產品,會產生腹瀉、嘔吐、記憶喪失等癥狀,嚴重者會昏迷,甚至死亡,因此軟骨藻酸又被稱為失去記憶性貝毒。生物測試法和高效液相色譜法是用于檢測軟骨藻酸的傳統(tǒng)方法,然均不能滿足快速檢測需求,嚴重影響海產品的食用安全。近年來,酶聯(lián)免疫法(ELISA)以特異性強、靈敏度高、操作簡便和檢測迅速等優(yōu)點被廣泛應用于環(huán)境污染物的分析中。為建立軟骨藻酸快速檢測方法,本文成功制備軟骨藻酸包被抗原DA-BSA和軟骨藻酸單克隆抗體,初步組裝成軟骨藻酸間接競爭ELISA檢測試劑盒,確定了一抗、包被抗原和二抗的最佳使用濃度、最佳封閉液和封閉條件、最佳包被條件、最佳溫育溫度和時間、最佳顯色條件等,并對其特異性、吸光度值(optical density,OD)變異系數(shù)、陰性樣品加標回收率和保質期進行測試。最后用所組裝的間接競爭ELISA試劑盒與高效液相色譜法(HPLC)對實際貝類樣品中軟骨藻酸含量進行了測定與比較。具體結果如下:1.將牛血清蛋白與半抗原軟骨藻酸偶聯(lián),成功獲得包被抗原DA-BSA,并...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１中國沿海赤潮分布圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｔｈｅ?ｔｉｄｅ?ｍａｐ?ｏｆ?Ｃｈｉｎａ?ｃｏａｓｔａｌ??

赤潮發(fā)生的次數(shù)均高于平均值；２０００－２００３年間，我國的赤潮災害發(fā)生數(shù)逐年上升，??２００３年達到１１９次，為歷史新高；２００４－２００９年赤潮發(fā)生次數(shù)總體上呈現(xiàn)下降趨勢，??但仍遠遠高于２０００年的２８次［１７］。我國近年來的赤潮多發(fā)地帶［１８］如圖１－１所示：??Ｐｒｏｓ?....

圖１－３軟骨藻酸異構體Ａ－Ｈ??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｉｓｏｍｅｒｓ?（Ａ－Ｈ）?ｏｆ?ｄｏｍｏｉｃ?ａｃｉｄ??ＤＡ?化學結構與紅藻氨酸（ｋａｉｎｉｃ?ａｃｉｄ，?ｋａｉｎａｌｅ．?ＫＡ）和谷氨酸（Ｌ－Ｇｌ?

Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｉｓｏｍｅｒｓ?（Ａ－Ｈ）?ｏｆ?ｄｏｍｏｉｃ?ａｃｉｄ??ＤＡ?化學結構與紅藻氨酸（ｋａｉｎｉｃ?ａｃｉｄ，?ｋａｉｎａｌｅ．?ＫＡ）和谷氨酸（Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｃ?ａｃｉｄ，Ｇｌｕ）??相似，是紅藻氨酸受體的興奮劑。紅藻氨酸和谷氨酸結構如

圖１－４谷氨酸和紅藻氨酸結構式??

Ｈ?Ｉｓｏｄｏｍｏｃ?ａｃｉｄ?Ｈ??圖１－３軟骨藻酸異構體Ａ－Ｈ??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｉｓｏｍｅｒｓ?（Ａ－Ｈ）?ｏｆ?ｄｏｍｏｉｃ?ａｃｉｄ??ＤＡ?化學結構與紅藻氨酸（ｋａｉｎｉｃ?ａｃｉｄ，?ｋａｉｎａｌｅ．?ＫＡ）和谷氨酸（Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｃ?ａｃｉｄ，Ｇｌｕ）?....

圖１－５?ＤＡ在大馬哈魚體內的分布情況??Ｆｉｇｕｒｅ?１－５?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｄｉｓｔｒａｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ＤＡ?ｉｎ?Ｓｌａｍｏｎ??

ＫａｔｈｉＡ．?Ｌｅｆｅｂｖｒｅ等［６４］對大馬哈魚（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｋｉａｕｔｃｈ）體內不同組織中?ＤＡ??含量進行了研宄分析，發(fā)現(xiàn)ＤＡ在大馬哈魚的腎和膽中含量較高，在大腦和肌肉中??含量較少，圖１－５是ＤＡ在大馬哈魚體內不同組織器官的分布情況：??１２０００?，??１....

本文編號：3915108