發(fā)布時間：2023-06-04 04:08

　　以水生動物作為受試動物來評價藥物的毒性效應近年來已逐步成為國際上環(huán)境科學與水域生態(tài)學領(lǐng)域的研究熱點。輪蟲是浮游動物的主要類群之一,以其繁殖速度快、生活周期短和對毒物敏感性高的優(yōu)點而經(jīng)常應用于生態(tài)毒理學研究中。百草枯(Paraquat)是一種有機雜環(huán)類除草劑,胡桃醌(Juglone)是一種從核桃楸(Juglans mandshurica Maxim)或者核桃(Juglans regia L)中提取出的萘醌類物質(zhì),這兩種藥物都能誘導機體形成過量的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),從而產(chǎn)生氧化毒性效應。本文選用兩種不同特性的輪蟲作為試驗材料——一種是目前研究已相對比較廣泛的萼花臂尾輪蟲(Brachionus calyciflorus),另一種是具有特殊生活史和表型多態(tài)性的卜氏晶囊輪蟲(Asplachna brightwelli)考察兩者對百草枯和胡桃醌的敏感程度,并探究兩種藥物的作用機理。在此基礎上,本文還通過cDNA末端快速克隆(RACE,rapid-amplification of cDNA ends)技術(shù)克隆出卜氏晶囊輪蟲的hsp70基因全長,并在此基...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 生態(tài)毒理學與水生態(tài)毒理學
        1.1.1 概念簡述
        1.1.2 水生態(tài)毒理學的國內(nèi)外研究概況
    1.2 輪蟲在生態(tài)毒理學研究中的應用
        1.2.1 輪蟲簡述
        1.2.2 萼花臂尾輪蟲與卜氏晶囊輪蟲基本特征的比較
        1.2.3 輪蟲作為毒理學受試動物的優(yōu)勢
        1.2.4 輪蟲作為毒理學受試動物的研究歷史
        1.2.5 輪蟲應用于生態(tài)毒理學的指標參數(shù)
    1.3 輪蟲相關(guān)分子生物學研究進展
        1.3.1 HSP70的特點和抗氧化作用研究
        1.3.2 輪蟲分子生物學研究概況
    1.4 百草枯與胡桃醌的毒理學研究基礎
    1.5 本文的研究目的與意義
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 研究意義
        1.5.3 技術(shù)路線
第2章 百草枯、胡桃醌對萼花臂尾輪蟲和卜氏晶囊輪蟲的急性毒理效應研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 輪蟲的采集、培養(yǎng)方法
        2.1.2 主要試驗儀器
        2.1.3 試驗藥品的配置
        2.1.4 輪蟲的試驗培養(yǎng)
        2.1.5 數(shù)據(jù)分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 百草枯對萼花臂尾輪蟲的急性毒性試驗結(jié)果
        2.2.2 百草枯對卜氏晶囊輪蟲的急性毒性試驗結(jié)果
        2.2.3 胡桃醌對萼花臂尾輪蟲的急性毒性試驗結(jié)果
        2.2.4 胡桃醌對卜氏晶囊輪蟲的急性毒性試驗結(jié)果
    2.3 討論
第3章 百草枯、胡桃醌對萼花臂尾輪蟲和卜氏晶囊輪蟲的生長發(fā)育各階段歷時的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 輪蟲的采集與培養(yǎng)
        3.1.2 主要試驗儀器
        3.1.3 試驗藥品的配置
        3.1.4 單“克隆”培養(yǎng)試驗
        3.1.5 試驗各終點的計算方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 百草枯和胡桃醌對萼花臂尾輪蟲和卜氏晶囊輪蟲壽命和繁殖的影響
        3.2.2 百草枯對萼花臂尾輪蟲生命周期各主要發(fā)育階段歷時的影響
        3.2.3 百草枯對卜氏晶囊輪蟲生命周期各主要發(fā)育階段歷時的影響
        3.2.4 胡桃醌對萼花臂尾輪蟲生命周期各主要發(fā)育階段歷時的影響
        3.2.5 胡桃醌對卜氏晶囊輪蟲生命周期各主要發(fā)育階段歷時的影響
    3.3 討論
第4章 卜氏晶囊輪蟲hsp70基因克隆和功能分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 主要試驗儀器
        4.1.2 輪蟲總RNA的提取(Trizol法)
        4.1.3 RNA質(zhì)量測定
        4.1.4 RNA逆轉(zhuǎn)錄
        4.1.5 目的基因兼并引物設計
        4.1.6 目的基因PCR擴增
        4.1.7 目的基因PCR產(chǎn)物的割膠回收
        4.1.8 連接PMDTM-19T載體
        4.1.9 菌液PCR驗證
        4.1.10 測序比對
        4.1.11 cDNA末端快速擴增技術(shù)(RACE)擴增基因全長
        4.1.12 目的基因生物信息學分析
        4.1.13 構(gòu)建系統(tǒng)進化樹
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 Asphsp70核苷酸序列分析
        4.2.2 HSP70多重序列比對
        4.2.3 Asphsp70系統(tǒng)進化樹
    4.3 討論
第5章 百草枯、胡桃醌對萼花臂尾輪蟲和卜氏晶囊輪蟲hsp70表達的影響研究
    5.1 材料與方法
        5.1.1 主要試驗儀器
        5.1.2 熒光定量PCR
        5.1.3 數(shù)據(jù)分析
    5.2 結(jié)果與分析
    5.3 討論
小結(jié)與展望
參考文獻
在讀期間發(fā)表的學術(shù)論文及研究成果
致謝



本文編號：3830659