氨氮是養(yǎng)殖水體中常見的重要污染脅迫因子。本文通過對三疣梭子蟹解毒代謝關鍵酶基因的克隆與表達分析，測定解毒代謝關鍵酶活力和相關產(chǎn)物含量的變化，研究了氨氮脅迫對三疣梭子蟹氨氮轉運和代謝途徑相關指標的影響，初步探討了三疣梭子蟹在氨氮脅迫下的解毒代謝機制。本論文主要包括以下三方面內容：（1）三疣梭子蟹解毒代謝關鍵基因的克隆與序列分析；（2）氨氮脅迫對三疣梭子蟹轉運途徑的影響；（3）氨氮脅迫對三疣梭子蟹代謝途徑的影響。主要結果如下： 1三疣梭子蟹解毒代謝關鍵基因的克隆與序列分析 通過設計兼并引物，利用RT-PCR方法從三疣梭子蟹鰓絲和肝胰臟分別克隆得到Rh蛋白和谷氨酸脫氫酶（GDH）部分基因序列。本實驗克隆Rh蛋白基因所用的上、下游引物分別是5’-TGGGCCATCCTGGTGaayggnttytt-3’和5’-GGCGGCGccccanggrtg-3’，克隆得到的Rh蛋白cDNA片段長612bp，編碼204個氨基酸序列，Rh蛋白氨基酸序列與其它蟹類相似性為86%-91%；克隆GDH所使用的上游引物序列是5’-ATGATCGGCATCACCccnggntgggg-3’，下游引物序列是5’-TGG...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 氨氮來源與危害
        1.1 養(yǎng)殖水體中氨氮的來源
        1.2 氨氮對水產(chǎn)動物的危害
    2 水產(chǎn)動物在氨氮脅迫下解毒代謝機制的研究進展
        2.1 魚類在氨氮脅迫下解毒代謝代謝機制的研究進展
        2.2 甲殼動物在氨氮脅迫下解毒代謝代謝機制的研究進展
        2.3 Rh 蛋白介導水產(chǎn)動物氨氮轉運的研究進展
            2.3.1 Rh 蛋白基因家族簡介
            2.3.2 Rh 蛋白介導魚類氨氮轉運的研究進展
            2.3.3 Rh 蛋白介導甲殼動物氨氮轉運的研究進展
            2.3.4 Rh 蛋白其它功能
第二章 三疣梭子蟹解毒代謝關鍵基因的克隆與序列分析
    第一節(jié) 三疣梭子蟹 Rh 蛋白基因的克隆與序列分析
        1 材料與方法
            1.1 實驗動物
            1.2 實驗方法
                1.2.1 總 RNA 提取
                1.2.2 cDNA 模板的合成
                1.2.3 PCR 擴增反應
                1.2.4 目的片段回收
                1.2.5 T 載體的連接
                1.2.6 目的片段的轉化與測序
        2 結果與討論
            2.1 Rh 蛋白基因 cDNA 片段的克隆分析
            2.2 Rh 蛋白基因的序列與同源性分析
            2.3 Rh 蛋白分子進化樹的構建
    第二節(jié) 三疣梭子蟹谷氨酸脫氫酶基因的克隆與序列分析
        1 材料與方法
            1.1 實驗動物
            1.2 實驗方法
        2 結果與討論
            2.1 GDH 基因 cDNA 片段的克隆分析
            2.2 GDH 基因的序列與同源性分析
            2.3 GDH 基因分子進化樹的構建
第三章 氨氮脅迫對三疣梭子蟹轉運途徑的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 氨氮濃度設置
        1.3 樣品制備
        1.4 實驗指標的測定方法
            1.4.1 含氮化合物含量的測定
            1.4.2 谷氨酰胺合成途徑關鍵酶活力的測定
            1.4.3 谷氨酰胺合成途徑關鍵酶 mRNA 表達分析測定
                1.4.3.1 總 RNA 提取
                1.4.3.2 去除基因組 DNA
        1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結果
        2.1 氨氮對三疣梭子蟹血淋巴氨氮含量的影響
        2.2 氨氮脅迫對三疣梭子蟹鰓轉運途徑的影響
        2.3 氨氮脅迫對三疣梭子蟹肝胰臟轉運途徑的影響
        2.4 氨氮脅迫對三疣梭子蟹肌肉轉運途徑的影響
        2.5 氨氮脅迫對三疣梭子蟹血淋巴轉運途徑的影響
    3 討論
        3.1 氨氮脅迫對三疣梭子蟹組織 Rh 蛋白基因表達影響的研究
        3.2 氨氮脅迫對三疣梭子蟹組織谷氨酰胺合成途徑影響的研究
    4 總結
第四章 氨氮脅迫對三疣梭子蟹代謝途徑的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 氨氮濃度設置
        1.3 樣品制備
        1.4 實驗指標的測定方法
            1.4.1 含氮化合物含量的測定
            1.4.2 黃嘌呤氧化還原酶與精氨酸酶活力的測定
                1.4.2.1 黃嘌呤氧化還原酶活力的測定
                1.4.2.2 精氨酸酶活力的測定
            1.4.3 黃嘌呤脫氫酶與精氨酸酶 mRNA 表達量的分析測定
        1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結果
        2.1 氨氮脅迫對三疣梭子蟹鰓絲代謝途徑的影響
        2.2 氨氮脅迫對三疣梭子蟹肝胰臟代謝途徑的影響
        2.3 氨氮脅迫對三疣梭子蟹肌肉代謝途徑的影響
        2.4 氨氮脅迫對三疣梭子蟹血淋巴代謝途徑的影響
    3 討論
        3.1 氨氮脅迫對三疣梭子蟹組織尿酸合成途徑影響的研究
        3.2 氨氮脅迫對三疣梭子蟹組織尿素合成途徑影響的研究
    4 總結
結論
參考文獻
致謝
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本文編號：3763952